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單抗制備-細(xì)胞融合篩選過程中遇到的問題及對(duì)策

閱讀:1204      發(fā)布時(shí)間:2013-12-31
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1,,融合率低,,陽(yáng)性孔少
①免疫的問題。由于免疫原性不強(qiáng)或者免疫途徑不當(dāng)造成免疫弱,,效價(jià)低,。
②融合過程中溫度、時(shí)間,、PEG分子量,作用時(shí)間等,。
③脾細(xì)胞是否取出了足夠多的細(xì)胞,,有無(wú)組織碎片干擾。
④融合前骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)是否完好,,細(xì)胞是否渾圓,,透亮,成對(duì)數(shù)生長(zhǎng),。


2,單抗親和力整體低
①免疫的問題,。免疫途徑不當(dāng)或者免疫原問題,。
②融合細(xì)胞篩選過程出現(xiàn)遺漏,篩選方法不當(dāng)或檢測(cè)方法不當(dāng),,造成沒有篩到高親和力的融合細(xì)胞,。
③由于亞克隆細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境不合適,,導(dǎo)致融合細(xì)胞染色體丟失,分泌特性改變,,親和力從高變低,,這時(shí)就需要及時(shí)更換培養(yǎng)液,當(dāng)細(xì)胞增長(zhǎng)到一定密度的時(shí)候,,培養(yǎng)基就開始變顏色,,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失,;控制好細(xì)胞的密度,密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),,造成染色體丟失;不要過于頻繁操作細(xì)胞,,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度不是很大的時(shí)候,,不要頻繁操作,否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長(zhǎng)形態(tài)發(fā)生明顯變化,。
操作細(xì)致,,防止細(xì)胞被支原體等微生物污染。

3,,抗體親和力從高變低
①?zèng)]有及時(shí)更換培養(yǎng)液,,當(dāng)細(xì)胞增長(zhǎng)到一定密度的時(shí)候,,培養(yǎng)基就開始變顏色,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),,造成染色體丟失或者性狀改變,。
②控制好細(xì)胞的密度,密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),,造成染色體丟失或者性狀改變。
③過于頻繁操作細(xì)胞,,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度不是很大的時(shí)候,不要頻繁操作,,否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長(zhǎng)形態(tài)發(fā)生明顯變化,。
④細(xì)胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數(shù)超過5次,,導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境經(jīng)常被改變,,弱的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞染色體丟失或者性狀改變。

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