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一,、單抗制備-骨髓瘤細胞SP2/0 培養(yǎng)過程中遇到的問題及對策

1,，細胞長的慢或細胞死亡
正常生長情況下，細胞一天傳代一次,，生長越好,，貼壁越多
對策：①培養(yǎng)基配方不對；② 接種密度太低,，低于10的4次方,；③污染了支原體或者其他不明細菌，支原體的現(xiàn)狀是出現(xiàn)小黑點,；細菌污染是渾濁,；霉菌污染是出現(xiàn)白色肉眼可見菌落；不明細菌污染出現(xiàn)砂狀平鋪背景,，視野發(fā)暗,。④細胞瓶刷洗不干凈

2，細胞形態(tài)異常
正常生長情況下,，細胞渾圓,，透亮，成對數(shù)生長,，生長越好,，貼壁多，懸浮少
對策：①培養(yǎng)基配方不對,；② 接種密度太低,，低于10的4次方；③污染了支原體或者其他不明細菌,，支原體的現(xiàn)狀是出現(xiàn)小黑點,；細菌污染是渾濁；霉菌污染是出現(xiàn)白色肉眼可見菌落,；不明細菌污染出現(xiàn)砂狀平鋪背景,，視野發(fā)暗。④細胞瓶刷洗不干凈

單抗制備-細胞融合篩選過程中遇到的問題及對策

1,，融合率低,，陽性孔少
①免疫的問題,。由于免疫原性不強或者免疫途徑不當造成免疫弱，效價低,。
②融合過程中溫度,、時間、PEG分子量,，作用時間等,。
③脾細胞是否取出了足夠多的細胞，有無組織碎片干擾,。
④融合前骨髓瘤細胞生長狀態(tài)是否完好,，細胞是否渾圓，透亮,，成對數(shù)生長,。

2，單抗親和力整體低
①免疫的問題,。免疫途徑不當或者免疫原問題,。
②融合細胞篩選過程出現(xiàn)遺漏，篩選方法不當或檢測方法不當,，造成沒有篩到高親和力的融合細胞,。
③由于亞克隆細胞生長環(huán)境不合適，導致融合細胞染色體丟失,，分泌特性改變,，親和力從高變低，這時就需要及時更換培養(yǎng)液,，當細胞增長到一定密度的時候,，培養(yǎng)基就開始變顏色，影響融合細胞的生長,，造成染色體丟失,；控制好細胞的密度，密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,，影響融合細胞的生長,，造成染色體丟失；不要過于頻繁操作細胞,，當細胞生長密度不是很大的時候,，不要頻繁操作，否則細胞容易出現(xiàn)死亡或者生長形態(tài)發(fā)生明顯變化,。
操作細致,，防止細胞被支原體等微生物污染。

3,，抗體親和力從高變低
①沒有及時更換培養(yǎng)液,，當細胞增長到一定密度的時候,，培養(yǎng)基就開始變顏色，影響融合細胞的生長,，造成染色體丟失或者性狀改變,。
②控制好細胞的密度,，密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失或者性狀改變,。
③過于頻繁操作細胞,，當細胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作,，否則細胞容易出現(xiàn)死亡或者生長形態(tài)發(fā)生明顯變化,。
④細胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數(shù)超過5次,，導致細胞生長環(huán)境經(jīng)常被改變,，弱的陽性雜交瘤細胞染色體丟失或者性狀改變。

三,、單抗腹水制備過程中遇到的問題及對策
1,，腹水少或者無腹水產(chǎn)生
①致敏不正確，不正確的使用致敏劑,，或者致敏時間與接種雜交瘤的時間相差太久,，一般是7-14天，具體看小鼠的腹部情況,。

②雜交瘤細胞或者致敏劑的接種位置不正確,，沒有打到腹腔，而是打到了皮下,。

③接種的雜交瘤細胞數(shù)量太少,，太多或者細胞狀態(tài)不好。一般不50萬個細胞左右為宜,。

④建議使用母鼠或者生育過的母鼠制備腹水,。
2，腹水沒有效價

①制備腹水的雜交瘤極不穩(wěn)定,，打到小鼠身上之前就失去抗體分泌能力或者打到腹腔內(nèi)就失去了分泌能力,。

② 致敏小鼠時采用了錯誤的致敏劑。
 ③接種的雜交瘤細胞數(shù)量太少,，或者細胞狀態(tài)不好,。
④ 由于注射方式和部位錯誤，形成了實體瘤,。