鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一,、僅針對某一特定抗原表位的抗體,。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，將具備這種特性的單個雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群,，從根本上解決了在抗體制備中長期存在的特異性和可重復(fù)性問題,，可直接用于疾病的診斷、預(yù)防,、治療以及免疫機制的研究,。
鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體的制備過程：
1、免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過程,。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射,?？乖ㄟ^血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,，使其活化,、增殖，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞,。
2,、細(xì)胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟,，在平皿內(nèi)擠壓研磨,，制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,，并加入促融合劑聚乙二醇,。在聚乙二醇作用下,，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞,。
3,、選擇性培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基,。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,，并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖,。
4,、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細(xì)胞，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞,，因此,，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng),。
5,、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。
9
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)