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實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>通過對裸鼠腫瘤組織樣品的前處理研磨破碎,,提取樣品中的蛋白;再驗(yàn)證通過外泌體干預(yù)的荷瘤鼠模型中,,腫瘤的基因表達(dá)情況是否與蛋白測序結(jié)果一致,。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備:冷凍組織研磨儀 JXFSTPRP-CLN-48
裸鼠腫瘤組織樣品的前處理研磨實(shí)驗(yàn)操作過程:
1.將小鼠通過注射麻醉劑慢慢失去知覺后,對小鼠進(jìn)行解剖取小鼠身上的腫瘤塊,。
2.取下腫瘤塊后在將腫瘤塊剪切成綠豆大小的塊狀,,可先放入液氮或者-80℃的冰箱中方便后期研磨。
3.冷凍研磨儀開機(jī),,先將儀器制冷功能打開,,溫度設(shè)置成-20℃,保證樣品在研磨時(shí)蛋白不會(huì)發(fā)生裂解,。
4.研磨儀預(yù)設(shè)溫度達(dá)到后,,將剛剛?cè)『眉羟泻蟮臉悠贩湃胙心ス苤?,每個(gè)研磨管盡量放100mg左右,,再往研磨管中加入4顆研磨珠,再加入蛋白提取液蓋上研磨管蓋,,進(jìn)行濕磨,。將研磨管放入適配器中,適配器再固定到研磨儀上。
5.設(shè)置研磨儀參數(shù),,設(shè)置好研磨頻率和時(shí)間,研磨次數(shù)2次,,研磨中斷時(shí)間15s,,經(jīng)過研磨后,,再進(jìn)行蛋白的提取。
實(shí)驗(yàn)前處理研磨操作注意事項(xiàng):
1,、研磨管放到適配器上,,一定要注意研磨管的平面配平,,否則會(huì)損壞研磨儀的寶塔。
2,、適配器在放到研磨儀寶塔上時(shí),,固定螺母一定要固定緊,,否則既會(huì)損壞研磨儀寶塔,,還會(huì)對適配器底部造成損壞。
裸鼠腫瘤組織樣品的前處理研磨實(shí)驗(yàn)前后效果圖:
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:裸鼠腫瘤組織樣品在經(jīng)過冷凍組織研磨儀儀的前處理研磨實(shí)驗(yàn)應(yīng)用后,,其對裸鼠腫瘤組織樣品提取的蛋白含量充足,;且低溫冷凍的實(shí)驗(yàn)環(huán)境也為蛋白質(zhì)活性的保留,、核酸降解的抑制得到的有效解決,。
冷凍組織研磨儀能在非常短的時(shí)間內(nèi)將土壤,、植物和動(dòng)物的組織,,器官等樣品完成研磨,、粉碎,。隨著近代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,,特別是腫瘤學(xué)和免疫學(xué)的需要,,動(dòng)物組織的研磨已經(jīng)成為了實(shí)驗(yàn)室不可少的一個(gè)環(huán)節(jié),。JXFSTPRP-CLN-48低溫研磨樣品,,實(shí)現(xiàn)無交叉污染的同時(shí),,低溫研磨樣品能夠有效抑制核酸降解,、保留蛋白質(zhì)活性,。是實(shí)驗(yàn)室樣品前處理的好幫手,。
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