你是否經(jīng)常使用相差顯微鏡來觀察你的細胞,？那相差顯微鏡是如何工作的,？為什么這種顯微鏡技術(shù)對科學(xué)家如此重要？相位對比如何使幾乎透明的細胞清晰可見,？來吧,，先睹為快。

　　什么是相差顯微鏡（Phas Contrast Microscopy）

　　相差顯微鏡是一種特殊的顯微鏡,，特別適用于觀察具有很高透明度的對象,，例如生物切片、油膜和位相光柵等等,。光波通過這些物體,，往往只改變?nèi)肷涔獠ǖ奈幌喽桓淖內(nèi)肷涔獠ǖ脑龇捎谌搜奂八心芰繖z測器只能辨別光波強度上的差別,，也即振幅上的差別,，而不能辨別位相的變化，因此用普通顯微鏡是難以觀察到這些物體的,。透明度很高的物體,，也稱為位相物體。相襯法（也叫位相反襯法）是通過空間濾波器將物體的位相信息轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的振幅信息,，從而大大提高透明物體的可分辨性,，該方法使科學(xué)家能夠以高水平的細節(jié)觀察有機和生物樣品，而不需要進行樣品制備,、染色或標記,。所以從這個意義上說,，相襯法是一種光學(xué)信息處理方法,，而且是最早的信息處理的成果之一,，因此在光學(xué)的發(fā)展-史-上具有重要意義。

　　相差顯微鏡和普通顯微鏡的區(qū)別是：用環(huán)狀光闌代替可變光闌,，用帶相板的物鏡代替普通物鏡,，并帶有一個合軸用的望遠鏡。

　　用途：相差顯微鏡主要用于觀察未經(jīng)染色的標本和活細胞,。

　　基本原理：

　　相差顯微鏡利用物體不同結(jié)構(gòu)成分之間的折射率和厚度的差別,，把通過物體不同部分的光程差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹ü鈴姸龋┑牟顒e，經(jīng)過帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實現(xiàn)觀測的顯微鏡,。主要用于觀察活細胞或不染色的組織切片,，有時也可用于觀察缺少反差的染色樣品。

　　相差顯微鏡把透過標本的可見光的光程差變成振幅差,，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度,，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過標本后發(fā)生折射,，偏離了原來的光路,，同時被延遲了1/4λ（波長），如果再增加或減少1/4λ,，則光程差變?yōu)?/2λ,，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減下,，提高反差,。在構(gòu)造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡4個特殊之處：

　　1.環(huán)形光闌（annular diaphragm） 位于光源與聚光器之間,，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,，焦聚到標本上。

　　2.相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ,。分為兩種：

　　（1）A+相板：將直射光推遲1/4λ,，兩組光波合軸后光波相加,，振幅加大，標本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮,，形成亮反差（或稱負反差）,。

　　（2）B+相板：將衍射光推遲1/4λ,，兩組光線合軸后光波相減,，振幅變小,，形成暗反差（或稱正反差），結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗,。

　　3.合軸調(diào)節(jié)望遠鏡 (centring telescope)：用于調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌的像與相板共軛面-完-全吻合,。　　

　　相差顯微鏡有哪些優(yōu)點,？

　　相位對比顯微鏡的一個重要優(yōu)勢是可以自然地研究任何活細胞,，而不需要固定、標記或染色,。

　　該技術(shù)產(chǎn)生的所有圖像可以是無標簽的,。這也為研究人員節(jié)省了時間，并減少了實驗之間出現(xiàn)錯誤或變化的機會,。

　　相位對比法對透明樣品效果很好,，因為額外的干擾使樣品更加明顯。在這種技術(shù)中,，整個物體都被照亮了,。

　　對于研究活細胞的細胞內(nèi)成分，相襯顯微鏡提供了相對較高的分辨率,。細胞線粒體,、有絲分裂的染色體、空泡和其他活細胞成分都可以用這種方法來研究,。

　　相差顯微鏡的組件也可以添加到幾乎所有類型的光學(xué)顯微鏡中,，只要相位物鏡符合顯微鏡的管長參數(shù)，聚光器可以與正確尺寸的環(huán)形相位環(huán)聯(lián)姻,。這使得它成為一種靈活和廣泛適用的技術(shù),。