小鼠巨噬細胞系RAW-264.7（生物安全等級2）在ibidi µ-Slides VI 0.4 和8孔腔室載玻片的培養(yǎng)方案,。這是一個特殊的細胞系的例子,，用于顯示粘附時間,，細胞密度和細胞形態(tài)的示范,。本應(yīng)用可根據(jù)您的具體實驗要求進行調(diào)整,。

　　1.細胞培養(yǎng)與材料制備　　

　　在將細胞接種到玻片中之前,，按照常規(guī)的方法培養(yǎng)細胞,?！　?/p>

　　µ-Slide VI 0.4 ：通道玻片和培養(yǎng)基，在37℃和5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜,。這對于避免隨著時間的推移出現(xiàn)氣泡至關(guān)重要,。為此，在50 ml器中填充適量的培養(yǎng)基,，并輕輕地將瓶蓋擰緊,。在 µ-Slide 8孔載玻片開放孔井中，氣泡可排出到大氣中,?！　?/p>

　　拆開µ-Slide的包裝，把它放在µ-Slide支架上,，并在準備細胞懸浮液時同時將蓋子放在 Luer 適配器/孔上,。

　　2.播種細胞

　　分離細胞：　　

　　吸出培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，并用PBS洗滌細胞一次,。每75cm2 燒瓶中加入3-5 ml的Accutase,，并將燒瓶放入培養(yǎng)箱中以加快分離速度。如果是RAW-264.7細胞系,，則大約需要8分鐘,。使用Accutase分離的細胞存活率更高?！　?/p>

　　2.1. 將細胞接種到µ-Slide VI 0.4中　　

　　在µ-Slide VI 0.4建議的細胞濃度：最終細胞數(shù)  0.3 x 10 5 cells/cm2,，制備濃度6 x 10 5cells/ml。通過將移液器底部直接放在通道的入口上,，將30 µl細胞懸浮液填充到每個通道中,。將蓋子蓋在玻片上，在37°C和5％CO2下孵育半小時以固定細胞,?！?/p>

　　細胞貼壁后,，分別用60 µl無細胞培養(yǎng)基填充儲液池。 避免將移液器吸頭直接指向通道的入口,。將玻片放回培養(yǎng)箱中,。　　

　　圖1：接種后一小時,，在ibiTreat µ-Slide VI 0.4（貨號80606）中的RAW-264.7　　

　　圖2: 在ibiTreat µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7,，孵育24小時后　　

　　圖3:在ibiTreat µ-Slide VI0.4中的RAW-264.7，培養(yǎng)四天后

　　2.2 將細胞播種在µ-Slide 8 well 中　　

　　在µ-Slide 8 well建議的細胞濃度：最終細胞數(shù) 0.3 x 10 5 cells/cm2 ,，制備濃度 1.1 x 10 5 cells/ml,。將300 µl 的細胞懸浮液注入各孔中。將蓋子蓋在玻片上,，在37°C和5% CO2中孵育,。不需要進一步添加培養(yǎng)基。

　　圖4：在ibiTreat µ-Slide 8 well(貨號：80826)中的RAW-264.7,，播種后1小時　　

　　圖5: 在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,，孵育24小時后

　　圖6：在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7，經(jīng)過四天的培養(yǎng)

　　為獲得最佳的分布的勻的細胞,，我們建議使用像µ-Slide VI 0.4 這樣的通道載玻片,。在8孔腔室載玻片中，細胞密度可能會在孔的整個表面上因點而異,，具體取決于細胞播種過程中的處理,。

　　3. 免疫熒光染色　　

　　像往常一樣為您的細胞固定和染色?！　?/p>

　　注意：在 µ-Slides 中染色時注意液體的處理　　

　　µ-Slide VI 0.4 ：更換液體,，先吸出兩個儲液池而不排空通道。 如果您使用的是真空設(shè)備,，請注意不要將吸頭直接放在通道的入口上,。 用100 µl新溶液沖洗通道3次。 從一側(cè)添加新的溶液,，通過通道流入另一個儲液池,，然后從另一側(cè)吸出，直到兩個儲液池都排空,。注意通道永遠不要干涸,！　　

　　µ-Slide 8孔載玻片：在 µ-Slide 8孔中，無需特殊處理措施,。像在任何其他培養(yǎng)皿或孔板中一樣的交換液體。