在體內(nèi),，各種其他參數(shù)對(duì)傷口愈合的影響更大,，例如不同細(xì)胞類型的相互作用,。 使用 Culture-Insert插件的體外 ibidi 傷口愈合實(shí)驗(yàn)將遷移速度與所有這些其他影響分開,，提供了一個(gè)客觀且可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境。

　　1,、Culture-Inserts插件可以重復(fù)使用嗎,？　　

　　盡管 Culture-Inserts 插件中的材料可高壓滅菌并且與酒精相容，但我們不建議重復(fù)使用,。 如果您仍想嘗試重復(fù)使用,，則需要建立一個(gè)用酸或堿的清潔程序。 ibidi沒有任何清潔Culture-Inserts插件的經(jīng)驗(yàn),，雖然它們可能會(huì)保持粘性,，但之前實(shí)驗(yàn)的殘留可能會(huì)影響重現(xiàn)性。

　　2,、可否在蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件嗎,？　　

　　可以，您可以在任何蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件,。 到目前為止,，還沒被報(bào)告與任何干燥表面不相容。

　　3,、是否可以使用 Culture-Insert 插件制作小于 500 µm 的傷口,？　　

　　不可以，Culture-Inserts 插件中最小和標(biāo)準(zhǔn)的傷口尺寸是 500 µm,。 Culture-Insert 4 Well /4孔插件會(huì)有一個(gè)額外的中心間隙,，傷口大小為 1000 µm。

　　4,、Culture-Insert 插件是如何固定在培養(yǎng)皿上的,？　　

　　Culture-Insert 插件由生物相容的硅膠材料制成。 硅膠底部有一個(gè)粘性表面,，可粘附（粘）在任何平坦、干燥,、均勻的表面,。 這種材料足夠柔軟可粘到表面上。 您可以用無菌鑷子按壓插件來簡(jiǎn)單地修復(fù)它,?！　?/p>

　　5、您是否曾經(jīng)遇到過 Culture-Inserts 插件無法粘附在定制涂層表面上的問題,？　　

　　只要表面干燥,，我們從未遇到過讓 Culture-Inserts 插件粘附在定制涂層表面上的任何問題。 但是,，潮濕的表面會(huì)導(dǎo)致泄漏,。 因此，請(qǐng)確保您的定制涂層表面*干燥。

　　6,、需要在 Culture-Insert 插件中播種多少個(gè)細(xì)胞才能進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),？　　

　　開始遷移實(shí)驗(yàn)時(shí)，Culture-Insert 插件中的細(xì)胞層應(yīng)融合,。 在所有實(shí)驗(yàn)中,，匯合細(xì)胞層的密度應(yīng)盡可能一致。 使用的接種細(xì)胞數(shù)量取決于您的細(xì)胞類型,，因此您可以在 Culture-Insert 2 Well 說明書中找到推薦的范圍和詳細(xì)方案,。

　　7、為什么移除 ibidi Culture-Insert 插件后細(xì)胞有時(shí)會(huì)從蓋玻片上脫落,？　　

　　以下是解釋細(xì)胞脫離的一些可能原因：　　

　　• 細(xì)胞密度太高,。 --> 播種更少的細(xì)胞（細(xì)胞層應(yīng)在 24 小時(shí)后生長至  融合，但不能過度生長）,。有關(guān)傷口愈合試驗(yàn)的詳細(xì)方案,，請(qǐng)參閱：傷口愈合／細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)新方法－如何劃出筆直均一的劃痕　　

　　• 細(xì)胞正在挨餓。 --> 增加每個(gè)插入孔的培養(yǎng)基體積,，或在細(xì)胞生長期間更換培養(yǎng)基,。　　

　　• 在極少數(shù)情況下,，細(xì)胞類型不能很好地粘附在 ibiTreat 表面,。 --> 首先，覆蓋蓋玻片表面以促進(jìn)細(xì)胞附著,。然后,，在插入 ibidi Culture-Insert 插件之前讓涂層干燥?！　?/p>

　　以下是使用帶有涂層的 ibidi Culture-Inserts 插件以促進(jìn)細(xì)胞粘附的一些額外提示：　　

　　• 我們強(qiáng)烈建議提前測(cè)試移除ibidi Culture-Insert 插件是否會(huì)破壞遷移間隙中的涂層,。這可以通過使用針對(duì)涂層蛋白的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行分析。如果遷移間隙區(qū)域中涂層的熒光信號(hào)與開放孔中的一樣均勻和強(qiáng)烈,，則可以假設(shè)在插入物移除后是保持完好的,。經(jīng)過幾次成功的測(cè)試后進(jìn)行實(shí)際實(shí)驗(yàn)通常是安全的?！?/p>

　　• 如果去除插入物破壞了大部分涂層,，則僅涂覆插件的孔，然后接種細(xì)胞,。取出插件后,，通過向培養(yǎng)基中添加低濃度涂層來填充間隙并孵育約 30 分鐘。之后,，用普通介質(zhì)替換涂層溶液并繼續(xù)進(jìn)行遷移實(shí)驗(yàn),?！　?/p>

　　8、當(dāng) Culture-Insert變干燥時(shí),，包被蛋白會(huì)失去活性嗎,？　　

　　這主要取決于與 Culture-Insert 插件一起使用的蛋白質(zhì)類型。 使用層粘連蛋白的人通常更喜歡在涂層和細(xì)胞接種之間保持水分,。 根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),，當(dāng)纖連蛋白和膠原蛋白 IV 干燥時(shí)，我們沒有發(fā)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞遷移速度有任何影響,。

　　9,、有沒有辦法用懸液細(xì)胞進(jìn)行傷口愈合實(shí)驗(yàn)，或者該實(shí)驗(yàn)僅適用于貼壁細(xì)胞,？　　

　　目前,，使用 Culture-Insert插件的傷口愈合實(shí)驗(yàn)只能用于貼壁細(xì)胞。 然而,，單個(gè)細(xì)胞的遷移研究可以在 µ-Slide 趨化性中通過將細(xì)胞嵌入到3D基質(zhì)（例如,，I 型膠原蛋白凝膠）中進(jìn)行。

　　10,、是什么使 Culture-Inserts插件在細(xì)胞接種過程中不會(huì)泄漏,？　　

　　Culture-Insert 插件由硅膠材料制成。 上部是粗料,，下部是非常柔軟的材料,，在按下 Culture-Insert 插件后會(huì)固定在表面上。 正確插入時(shí)是不會(huì)有任何泄漏的,?！　?/p>

　　11、有時(shí)很難在 Culture-Insert 插件中看到細(xì)胞層的匯合,。 您有什么建議,？　　

　　當(dāng)使用相差顯微鏡和小孔時(shí)，例如 Culture-Insert 插件或 96 孔板,，空氣-水界面之間的彎月面會(huì)導(dǎo)致表面強(qiáng)烈彎曲,。 這會(huì)破壞除孔中心以外的任何地方的相位對(duì)比效應(yīng)?！　?/p>

　　一種解決方案是用細(xì)胞培養(yǎng)基*均勻地填充 Culture-Insert 的兩個(gè)孔。 通過這樣做,，您可以在孔上方的介質(zhì)和空氣之間創(chuàng)建一個(gè)平面,。 請(qǐng)記住，這可能會(huì)導(dǎo)致兩孔之間的交叉污染,。

　　12,、有時(shí),，細(xì)胞傾向于聚集在 ibidi Culture-Insert插件的邊緣。 怎樣才能避免這種情況,？　　

　　當(dāng)細(xì)胞在 Culture-Insert插件中生長到非常高的密度時(shí),，會(huì)觀察到了這種情況。 為了減少細(xì)胞團(tuán)塊,，您應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)使用較低的細(xì)胞密度,。 然而，有時(shí)細(xì)胞會(huì)粘在與細(xì)胞相容的硅膠上,。 在這種情況下,，我們建議較少孵育時(shí)間和/或細(xì)胞數(shù)量。

　　13,、Culture-Insert 如何在不造成細(xì)胞損傷的情況下模擬生理傷口,？　　

　　使用體外實(shí)驗(yàn)時(shí)，很難以可重復(fù)的方式模擬生理傷口,。 當(dāng)然,，來自死細(xì)胞的碎片可能在與傷口愈合相關(guān)的遷移中發(fā)揮作用。 使用 Culture-Insert插件的 ibidi 傷口愈合實(shí)驗(yàn)提供了可重復(fù)的,、無損傷的細(xì)胞貼片,。