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當(dāng)前位置:拓赫機(jī)電科技(上海)有限公司>>技術(shù)文章>>ibidi通道載玻片中貼壁細(xì)胞的消化傳代
在本應(yīng)用示例中,,我們展示了如何從μ-Slide VI 0.4通道載玻片中洗脫培養(yǎng)后的貼壁細(xì)胞。該方法適用于不同規(guī)格的通道載玻片,。
1.根據(jù)實驗說明將您的細(xì)胞培養(yǎng)到所需的匯合度,?! ?/p>
裝有細(xì)胞和培養(yǎng)基的μ-Slide VI 0.4
2.從μ-Slide VI 0.4通道載玻片的通道口中取出培養(yǎng)基,不要吸干整個通道,?! ?/p>
3.用PBS或任何其他適當(dāng)?shù)木彌_液清洗兩次,然后從另一端吸出,。每個通道使用體積為100μl,。我們建議同時使用細(xì)胞培養(yǎng)吸引器和移液器。如圖所示,,使用吸引器的尖尖位置和移液器(如圖),。
µ-Slide VI 0.4的一個通道的橫截面顯示了PBS洗滌步驟
4.使用細(xì)胞培養(yǎng)吸液器從通道中吸出全部PBS,,在這個步驟中,,緩沖液從容器口和通道中*去除
5.立即用30μl分離溶液(例如胰蛋白酶/EDTA或Accutase)重新填充通道。如圖所示,,將移液器吸頭直接放在通道的入口上,。將30µl分離溶液填充到空通道中。
6.再將您的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中,。由于生長面積和體積的縱橫比不同,,分離過程可能需要比平時更長的時間(2-3分鐘)。用相差顯微鏡觀察細(xì)胞脫離,。如果沒有發(fā)生分離,,請增加分離溶液的濃度或使用更長的孵育時間。細(xì)胞會在幾分鐘后分離,。
7.細(xì)胞成圓形并分離后,,用100μl新鮮培養(yǎng)基或終止溶液沖洗每個通道。分離的細(xì)胞被100µl新鮮培養(yǎng)基沖出通道,。
8.從通道的另一端取出細(xì)胞懸液,。如果還剩一些細(xì)胞,請重復(fù)沖洗步驟,。
9.收集懸浮細(xì)胞并去除或稀釋分離溶液
在細(xì)胞懸浮后,,可以通過從通道中吸出溶液來收集
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