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您聽說過有關(guān)ibidi聚合物蓋玻片的完整故事嗎,?畢竟,它是我們µ-Slides,、µ-Dishes和µ-Plates的核心,,在很大程度上促成了我們的成功。
這一切都始于2000年代初,,當時三名博士生和他們的PI有一個愿景,,即成立一家通過結(jié)合細胞培養(yǎng)和高分辨率顯微鏡來*改變基于細胞的分析的公司。到目前為止,,細胞生物學(xué)家不得不在對細胞生長有利但對成像不利(例如,,聚苯乙烯制成的組織培養(yǎng)瓶)或?qū)Τ上裼欣珜毎L不利(例如,玻璃蓋玻片)的表面之間進行折中,。
這種困境促使ibidi創(chuàng)始人開始尋找一種即具有玻璃光學(xué)特性的材料,,同時又能保證良好的細胞粘附和生長。他們最終發(fā)現(xiàn)了一種具有出色光學(xué)質(zhì)量的聚合物箔,,這就是ibidi聚合物蓋玻片,。它可以粘合到上部結(jié)構(gòu),這種組合是第一個ibidi顯微鏡室,。然而,,這種特殊的聚合物箔非常疏水,細胞不會粘附在上面,。幸運的是,,創(chuàng)始人發(fā)現(xiàn)聚合物箔可以通過物理處理來解決這個問題,特殊的表面處理ibiTreat誕生了,!
ibidi聚合物蓋玻片的光學(xué)特性
使用帶有聚合物蓋玻片底部的ibidi實驗室器具進行顯微鏡檢查的科學(xué)家們通常甚至沒有意識到它不是由玻璃制成的——僅僅是因為您無法分辨成像質(zhì)量的差異,。
那么,這是為什么呢,?某些材料特性對于高質(zhì)量的顯微鏡檢查是不可少的,。我們將仔細研究其中五個參數(shù)(蓋玻片厚度、折射率,、阿貝數(shù),、透射率和自發(fā)熒光),,以及ibidi聚合物蓋玻片的規(guī)格與玻璃和傳統(tǒng)聚苯乙烯組織培養(yǎng)容器的比較。
蓋玻片厚度
蓋玻片的厚度在成像質(zhì)量中起著重要作用,,因為大多數(shù)顯微鏡物鏡都設(shè)計為聚焦在具有一定厚度的蓋玻片頂部的樣本上(圖1),。在細胞顯微鏡中,標準蓋玻片厚度為0.17mm(170µm+20/–10µm),,對應(yīng)于#1.5蓋玻片,。雖然大多數(shù)聚苯乙烯組織培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿的底部厚度為500–1000µm,但ibidi聚合物蓋玻片的厚度與標準#1.5玻璃蓋玻片的厚度相同,。
圖1:顯微鏡物鏡針對170µm的標準蓋玻片厚度進行了優(yōu)化(左),。使用其他蓋玻片厚度高分辨率物鏡無法聚焦在樣品上(右)。
折射率
ibidi聚合物蓋玻片的折射率(測量特定材料內(nèi)的光速)為1.52,,因此與玻璃的折射率相同,。相比之下,由聚苯乙烯制成的標準組織培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿的折射率為1.58,。這個值很重要,,因為顯微鏡物鏡是為折射率為1.52的蓋玻片設(shè)計的。
透光率
為了提供高質(zhì)量的成像結(jié)果,,顯微鏡載體的傳輸能力必須在各種不同的波長上都很高,。玻璃和ibidi聚合物蓋玻片就是這種情況。標準聚苯乙烯材料會阻擋紫外線,,這使得它們并不真正適用于所有顯微鏡技術(shù)和熒光團(圖2)
圖2:各種蓋玻片和細胞培養(yǎng)材料在不同波長下的透射曲線,。
自發(fā)熒光
顯微鏡載體材料的自發(fā)熒光特性可以通過在顯微鏡下顯示為高背景信號來干擾成像過程。雖然ibidi聚合物蓋玻片材料和玻璃的自發(fā)熒光非常低,,但由聚苯乙烯制成的培養(yǎng)皿具有非常高的自發(fā)熒光(圖3),。
圖3:不同蓋玻片和細胞培養(yǎng)材料在不同波長下的自發(fā)熒光強度。
ibidi聚合物蓋玻片的細胞培養(yǎng)特性
到目前為止,,我們已經(jīng)談了很多關(guān)于ibidi聚合物蓋玻片的光學(xué)特性以及它如此適合高質(zhì)量成像的原因,,但細胞呢?
他們在這個表面上感覺舒服嗎,?他們喜歡依附并在上面成長嗎,?答案很簡單,是的,!這就是為什么:
表面剛度
首先,塑料比玻璃更柔軟,,這使得它的表面彈性更類似于體內(nèi)組織(Discheretal.,2005;)
圖4:不同組織以及蓋玻片和細胞培養(yǎng)材料的表面彈性,。
組織培養(yǎng)處理
其次,與玻璃相比,,塑料的表面可以進行修飾,,使其更具親水性,,這是大多數(shù)貼壁細胞類型所喜歡的。這種物理表面處理(不是涂層)通常稱為組織培養(yǎng)處理,。大多數(shù)用于細胞培養(yǎng)的塑料容器都是以這種方式修改的,。在ibidi,我們將聚合物蓋玻片的組織培養(yǎng)表面改性稱為“ibiTreat”,,它不是蛋白質(zhì)涂層,,而是增強細胞附著的物理表面處理。當然,,額外的蛋白質(zhì)涂層可以應(yīng)用于未涂層的ibidi聚合物蓋玻片或ibiTreat版本,,而不會影響光學(xué)質(zhì)量。
透氣性
細胞喜歡在ibidi聚合物蓋玻片上生長的第三個原因是其透氣性,。這允許通過整個底部表面進行氣體交換,,為細胞提供新鮮的O2并允許CO2離開細胞環(huán)境(圖5)。
圖5:與玻璃(右)相比,,聚合物蓋玻片允許通過底部表面進行氣體交換(左),。
鑒于上述所有原因,ibidi聚合物蓋玻片結(jié)合了兩方面的優(yōu)點——高分辨率成像的理想光學(xué)和細胞附著和生長的*佳表面*,。還是不服氣,?可立即訂購免費樣品。
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