WB，蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)又稱免疫印跡(immunoblotting),，是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法。通過抗原抗體反應(yīng)對(duì)目標(biāo)蛋白的表達(dá)進(jìn)行半定量檢測(cè),，還可用于蛋白-蛋白,、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后續(xù)分析。WB作為一種方便可靠的研究工具,，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究,、抗體活性檢測(cè)和疾病早期診斷等多個(gè)方面，將與質(zhì)譜和蛋白質(zhì)芯片等技術(shù)一起在蛋白質(zhì)組時(shí)代發(fā)揮重要作用,。

目前科研人的 WB 現(xiàn)狀就是干貨都懂,，實(shí)驗(yàn)狀況卻頻出。辛辛苦苦花時(shí)間制備的細(xì)胞卻遇到提取液檢測(cè)不到目的蛋白,、目的蛋白信號(hào)弱 ,、轉(zhuǎn)膜效率低 、顯色或曝光后無條帶 ,、Western blot背景高且不均勻,、非特異性條帶、條帶拖尾或變形等常見的問題,。有效的樣品制備是影響 WB 實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性的重要因素,。貴州醫(yī)科大學(xué)分子重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室就使用上海凈信冷凍研磨儀制備了人體胃癌細(xì)胞樣品提取蛋白做WB實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)樣品：人體胃癌細(xì)胞；

實(shí)驗(yàn)器材：冷凍研磨儀JXFSTPRP-CLN,、研磨管,、氧化鋯珠若干；

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.細(xì)胞沉淀,，加緩沖液,，提取液，離心重懸,；

2.加入氧化鋯珠，與細(xì)胞沉淀物的比例1:1,；

3.設(shè)置研磨參數(shù),，啟動(dòng)。

實(shí)驗(yàn)效果圖：

研磨前（未加研磨珠-加研磨珠-研磨后)

附：實(shí)驗(yàn)儀器圖片凈信冷凍研磨儀JXFSTPRP-CLN

上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀是一種快速,、高效,、制冷的研磨系

統(tǒng)。它能在非常短的時(shí)間內(nèi)將土壤,、植物和動(dòng)物的組織/器官,、細(xì)菌、酵母,、真

菌,、孢子、古生物標(biāo)本等樣品完成研磨,、粉碎,、混合機(jī)細(xì)胞破壁。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué),、醫(yī)藥,、生化、環(huán)境,、地質(zhì),、農(nóng)業(yè)、林業(yè),、質(zhì)檢,、材料等領(lǐng)域。