許多因素都會影響峰形和保留時間,，例如色譜柱尺寸,、流動相添加劑和分析物特性。在液相色譜方法開發(fā)中,，柱溫是一個重要且經常被忽視的因素,。這是因為柱溫會影響峰形、保留和背壓,。關于保留時間,，隨著柱溫的升高,，保留時間會減少,。這是因為，色譜柱的溫度越高,，分析物在色譜柱的固定相和流動相之間交換得越快,。隨著這個過程變得越來越快，分析物的保留時間不會變長,，從而導致保留時間更短,，峰形通常更有效。但是,，請記住,，升高溫度對所有分析物的影響并不相同，這意味著保留因子對每種分析物的影響可能不同,。例如,，在下面的圖 1 和圖 2 中，使用了相同的方法和相同的色譜柱,，但這些方法使用兩種不同的色譜柱溫度運行,，30℃和 55℃。在本例中,，所有分析物的保留時間均較短,，差異高達 0.19 分鐘。

圖 1：30℃下 Force Biphenyl 50 x 3mm, 3 µm 上的脂肪酸乙酯,。

圖 2：55℃下 Force Biphenyl 50 x 3mm, 3 µm 上的脂肪酸乙酯,。

但是,，如果您在分離峰時遇到困難，或者想要在峰間獲得更好的分離度,，嘗試降低柱溫可能會有所幫助,。正如增加柱溫會導致保留時間縮短，因為柱上的相互作用速度增加,，降低溫度會起到相反的作用,，這反過來有助于分析物的分離。還有一些分析物在較低的柱溫下表現出更好的分離效果,。例如,，CBDA、CBGA,、CBC 和 THCA 等一些大·麻素在較低溫度下表現出z佳分辨率,。在下面的示例中，化合物的第1個色譜圖是在 40℃的柱溫下分析的C,，CBDA 和 CBGA 或 CBC 和 THCA 之間沒有基線分辨率,，但是，當柱溫為 30℃ 時,，化合物的分離度更好,。這可以在下面的圖 3 和圖 4 中看到。

圖 3：大·麻素在 40℃柱溫下的色譜圖,。

圖 4：大·麻素在 30℃柱溫下的色譜圖,。

雖然上述情況在大多數情況下都是正確的，但在某些情況下,，較高的溫度對于較短的保留時間和分析物分辨率來說效果更好,。麥角生物堿差向異構體和 PFAS 化合物在較高的柱溫下顯示出z佳結果。在下面的示例中（圖 5）,，使用 Raptor Biphenyl 100 x 2.1mm,，2.7µm 色譜柱在 50℃和 60℃下分析了麥角津和麥角津。在 50℃時,，兩種分析物沒有分離,，但在更高的柱溫，60℃,，兩種分析物開始分離,。

圖 5：柱溫對麥角生物堿差向異構體的影響。

柱溫也會影響柱的背壓,。由于高流動相粘度會導致高背壓,，因此提高色譜柱溫度有助于降低流動相粘度，從而降低背壓,。例如,，在上面的圖 1 和圖 2 中,，兩者的起始條件、流動相和梯度條件都相同,。但是,，兩者的柱溫不同。當柱溫設置為 30℃時,，壓力為 2100 psi,。當柱溫設置為 55℃時，壓力為 1500 psi,，產生的 psi 差值約為 600 psi,。

雖然較高的柱溫有助于改善峰形和縮短保留時間，但重要的是不要超過柱的推薦溫度,。在色譜柱上使用過高的溫度會導致色譜柱壽命大大縮短,。您通常可以在制造商的色譜柱使用指南中找到色譜柱的z高溫度,。

因此,，請記住，盡管柱溫經常被忽視,，但它是您在設置方法時需要優(yōu)化的一個重要參數,。為您的方法中的分析物找到合適的柱溫可能需要反復試驗，但在早期方法開發(fā)中考慮這個參數可以帶來更好的分辨率和更有效的方法,。