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多糖涂敷型手性柱(反相流動相)沖洗方法
當(dāng)手性色譜柱分離度下降,、
柱壓過高等色譜柱異?,F(xiàn)象發(fā)生時(shí),,
才需要使用本方法沖洗
1,、一般情況下,,使用常規(guī)方法沖洗色譜柱;若常規(guī)方法無效,,則使用特殊方法一沖洗色譜柱,;若特殊方法一無效,則使用特殊方法二沖洗色譜柱,。
2,、沖洗過程中,10µm柱柱壓請勿超過3Mpa,,5µm柱柱壓請勿超過6Mpa,,3µm柱柱壓請勿超過15Mpa。
3,、以下沖洗過程中涉及的流速僅供參考,,實(shí)際操作中以柱壓不超過以上說明為宜。
4,、以下沖洗過程中提到的20倍柱體積,,以4.6*150mm規(guī)格柱為例,約為30mL,。



常規(guī)方法:
1,、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v),,流速0.5ml/min,,沖洗20倍柱體積;
2,、沖洗結(jié)束,,驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否柱效有提高,。
特殊方法一:
1,、 用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,,沖洗20倍柱體積,;
2、逐漸提高甲醇的比例到100%,,然后以甲醇100%,,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;
3,、逐漸增加水的比例至90%,,即水/甲醇(90/10,v/v);
4,、沖洗結(jié)束,,驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否柱效有提高,。
特殊方法二:
1,、用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,,沖洗20倍柱體積,;
2、逐漸提高甲醇的比例到100%,,然后以甲醇100%,,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積,;
3,、再用酸性流動相,甲醇/三氟·乙酸(100/0.1,v/v),,0.3ml/min的流速,,沖洗20倍柱體積;
4,、再用中性流動相甲醇過渡,,甲醇100%,0.3ml/min的流速,,沖洗20倍柱體積,;
5、逐漸增加水的比例到90%,,即水/甲醇(90/10,v/v),;
6、沖洗結(jié)束,,驗(yàn)柱或重復(fù)之前的樣品實(shí)驗(yàn),,看是否有提高柱效。