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多糖涂敷型手性柱(反相流動相)沖洗方法

時(shí)間:2022-11-11 閱讀:1684
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當(dāng)手性色譜柱分離度下降,、

柱壓過高等色譜柱異?,F(xiàn)象發(fā)生時(shí),,

才需要使用本方法沖洗

以下沖洗步驟及流動相體系僅適用于大賽璐多糖涂敷型反相手性柱AD-RH/AD-3R,AS-RH/AS-3R,,AY-RH/AY-3R,,AZ-RH/AZ-3R,OD-R/OD-RH/OD-3R,,OJ-RH/OJ-3R,,OX-RH/OX-3R,OZ-RH/OZ-3R,流速僅適用于3/5/10µm, 4.6*150/250mm規(guī)格,,對于其他規(guī)格的手性柱,,其沖洗時(shí)所用的流速請根據(jù)各自所能耐受柱壓不同另行調(diào)整。


1,、一般情況下,,使用常規(guī)方法沖洗色譜柱;若常規(guī)方法無效,,則使用特殊方法一沖洗色譜柱,;若特殊方法一無效,則使用特殊方法二沖洗色譜柱,。

2,、沖洗過程中,10µm柱柱壓請勿超過3Mpa,,5µm柱柱壓請勿超過6Mpa,,3µm柱柱壓請勿超過15Mpa。

3,、以下沖洗過程中涉及的流速僅供參考,,實(shí)際操作中以柱壓不超過以上說明為宜。

4,、以下沖洗過程中提到的20倍柱體積,,以4.6*150mm規(guī)格柱為例,約為30mL,。



沖洗方法

常規(guī)方法:

1,、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v),,流速0.5ml/min,,沖洗20倍柱體積;

2,、沖洗結(jié)束,,驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否柱效有提高,。

特殊方法一:

1,、 用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,,沖洗20倍柱體積,;

2、逐漸提高甲醇的比例到100%,,然后以甲醇100%,,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;

3,、逐漸增加水的比例至90%,,即水/甲醇(90/10,v/v);

4,、沖洗結(jié)束,,驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否柱效有提高,。

特殊方法二:

1,、用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,,沖洗20倍柱體積,;

2、逐漸提高甲醇的比例到100%,,然后以甲醇100%,,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積,;

3,、再用酸性流動相,甲醇/三氟·乙酸(100/0.1,v/v),,0.3ml/min的流速,,沖洗20倍柱體積;

4,、再用中性流動相甲醇過渡,,甲醇100%,0.3ml/min的流速,,沖洗20倍柱體積,;

5、逐漸增加水的比例到90%,,即水/甲醇(90/10,v/v),;

6、沖洗結(jié)束,,驗(yàn)柱或重復(fù)之前的樣品實(shí)驗(yàn),,看是否有提高柱效。





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