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| 研究級顯微鏡 | |
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| IX71/IX81 | |
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| IX2系列 | |
奧林巴斯IX2倒置顯微鏡與嶄新的UIS2 光學系統(tǒng)相結(jié)合,開創(chuàng)了活細胞成像的新,。
隨著新的熒光技術(shù)開發(fā),,光激發(fā)和操作的方法在活細胞實驗中日益普及,越來越多的研究人員要求在傳統(tǒng)的可見光譜外使用光損傷較小的近紅外光譜,。奧林巴斯公司在IX2系列顯微鏡上使用了嶄新的UIS2光學系統(tǒng),,恰如其分地適應(yīng)了這類要求。這種新型的光學系統(tǒng)有著*的信噪比,,在更寬的波長范圍內(nèi)消除色差,,有著平坦的高透射率。該系統(tǒng)建立了全新的熒光性能標準,,不必損傷細胞,,就能有效地檢測到微弱的熒光信號,并且優(yōu)化了多色觀察,。IX2倒置顯微鏡能夠在超寬光譜上生成*的高質(zhì)量圖像,,是廣大研究人員進行活細胞觀察的理想選擇。
UIS2 光學元件具有大的信噪比和用于活細胞熒光成像的光學性能
超高的信噪比,,能夠得到*的圖像
嶄新的UIS2物鏡的信噪比*,,高于現(xiàn)有物鏡50%。這種物鏡的新特性還包括精選了低自發(fā)熒光玻璃(通過全反射鍍膜和連接材料,,顯著減少了自發(fā)熒光),,提高了數(shù)值孔徑,增強了信號亮度,。UIS2系統(tǒng)在弱激發(fā)光下,,能夠有效探測極弱熒光,從而建立了活細胞熒光成像的新標準,。
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物鏡 UPLSAPO/100XO 熒光激發(fā)塊 U-MNIBA3 | 物鏡 UPLAPO/100XO 熒光激發(fā)塊 U-MNIBA2 |
高數(shù)值孔徑物鏡,,用于熒光成像
用于UIS2系統(tǒng)的兩種新物鏡有:PLAPON60XO,它的數(shù)值孔徑為1.42,,適合熒光成像,;UPLSAPO100XO,,適合所有用途。這兩種物鏡都有很高的熒光信噪比,,而且都能夠在45mm齊焦距下有非常好的UV激發(fā)效果。UPLSAPO100XO能夠提供直到340nm的高透過率,。
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擁有更寬波長范圍內(nèi)的高透過率
IX2系列的內(nèi)置物鏡采用UW多層鍍膜技術(shù),,能夠有效消除超寬譜帶上的反射,在可見光到近紅外光的波長范圍內(nèi)能夠?qū)崿F(xiàn)平坦的高透過率,,在近紅外和紫外范圍內(nèi)的透過率顯著提高,。總之,,在較寬波長范圍內(nèi)的性能使它非常適合當今需要的研究用途,。
有效消除直到近紅外范圍的色差
的UIS2物鏡是UPLSAPO系列,它杰出的超級復消色差特點有效地消除了從可見光譜直到1000nm范圍內(nèi)的色差,。這意味著從紫外到紅外范圍內(nèi)的成像都可以只用一個物鏡實現(xiàn),。這一系列物鏡在使用覆蓋很寬譜帶的熒光進行多色觀察時,可以獲得出色的清晰圖像而不產(chǎn)生顏色偏移,。
雙層多光口設(shè)計保證了輸入/輸出靈活性
- 后上光口
后上光口不改變載物臺高度,,所以不影響鏡架穩(wěn)定性
這一光口可做光路輸入口,可裝一個附加熒光照明器
- 右側(cè)光口
右側(cè)光口裝置(IX2-RSPC-2:可選件,,視場數(shù):16)帶有一個結(jié)像透鏡,,可以安裝一個C型接口CCD照相機。
- 后下光口
能夠安裝冷CCD DP30BW與同類設(shè)備,。
- 左側(cè)光口
在這一光口上,,原始圖像平面距顯微鏡鏡架102mm,具有很大的靈活性,,用以安裝濾色鏡轉(zhuǎn)盤或者超低0.25X或5X照相機適配器,。
與雙光口視頻適配器結(jié)合,能夠獲得兩個原始圖像,。(可選件)
- 底光口
使用IX2-TVR (T型接口),,獲得原始圖像。
雙層光學設(shè)計同時兼容近紅外
雙層結(jié)構(gòu)的內(nèi)部設(shè)計有平行光束的輸入輸出以及多光口結(jié)構(gòu),,用以獲取原始圖像,。為了讓光譜范圍盡可能地大,每層的光路分支都兼容近紅外光譜,。即使同時使用多個光口,,載物臺高度也不變化。因此,,系統(tǒng)的穩(wěn)定性和照明性能保持不變,。
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提高了近紅外透過率
IX2系列采用UIS2 光學系統(tǒng),,提高了側(cè)光口、后光口和底光口的紅外透過率,,能夠提供多方面的高性能,,以適應(yīng)未來研究的需要。
高主機性能
捕捉高清晰度原始圖像
使用平行光束后,,光線可以從后上光口或右側(cè)光口捕捉或傳遞,。由于UIS2光學系統(tǒng)不需要額外補償(即,補償只通過物鏡透鏡進行),,所以能夠捕捉到清晰的原始圖像,。*
* “原始圖像”是指光線通過物鏡后聚焦生成的*個圖像。沒有光線質(zhì)量損失,,也沒有圖像變差,。
V形光路,降低光線損失
為了把反射時的光線損失減少到小程度,,采用了簡單的V形光學結(jié)構(gòu),。這種結(jié)構(gòu)將顯微鏡內(nèi)部的反射減少到僅僅一次,降低了光線損失,,能夠觀察到非常微弱的熒光信號,。
熱補償延遲透鏡組件:用于觀察光路的熱補償延遲光學元件,包含帶有不同熱特性的組合透鏡,,能夠補償溫度變化造成的模糊
阻止熱膨脹,,避免模糊的方法
外接電源:在長時間段延時觀察,環(huán)境溫度變化或者從空調(diào)中吹出的空氣將會使顯微鏡產(chǎn)生一些熱形變,。由于這種形變會造成模糊,,IX2系列設(shè)計組對這個問題投入了的關(guān)注。應(yīng)對措施包括將透射光照明電源放置到顯微鏡外部,,這就減少了內(nèi)部產(chǎn)生的熱形變,,將模糊程度降低到傳統(tǒng)模塊的七分之一。提供各類附件以穩(wěn)定長時間段的延時觀察,,例如恒溫培養(yǎng)箱,。
鏡體高度穩(wěn)定
為了將各個區(qū)域的穩(wěn)定性大化,奧林巴斯公司簡化或縮短了從聚焦裝置到物鏡轉(zhuǎn)換的結(jié)構(gòu),,這就將圖像傳輸階段的扭曲減小,。在使用物鏡校正環(huán)或諾馬斯基DIC 滑板時順理成章地防止了模糊。
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鏡體小巧,,便于操作
由于鏡體設(shè)計小巧,,空間足以在顯微鏡上設(shè)計兩側(cè)光口,底光口以及后光口,,留下的兩側(cè)區(qū)域足以很方便地安裝各類周邊設(shè)備,。使用工具,,顯微鏡可以安裝到一個防震鏡座上,取下顯微鏡后面的擴展支架后,,顯得更加小巧玲瓏,。
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可變傾角雙目觀察筒U-TBI90
可變傾角雙目觀察筒帶有35—85度傾角。不使用時,,觀察筒可以向上翻起并收好,,以免突出桌子邊沿??勺儍A角觀察筒可以讓每一個使用人員根據(jù)個人情況選擇輕松的觀察姿勢,同時也可以站立觀察,。
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無須聚焦的校正環(huán)
新開發(fā)的LUCPLFLN40X(N.A. 0.6, W.D.3.4mm☆)和LUCPLFLN60X(N.A. 0.7, W.D. 1.5---2.2mm)適用于任意厚度的容器,。在校正由不同厚度容器所造成的球差時,轉(zhuǎn)動校正環(huán)不會使聚焦變模糊,。校正操作簡單,,優(yōu)化了觀察圖像。
新的熒光系統(tǒng)
信噪比提高,,能夠有效檢測到非常微弱的熒光
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信噪比更高,,在熒光觀察時,能夠輸出更明亮,、反差更高的圖像
為了大程度地減小細胞損傷或熒光衰減,,理想的顯微鏡應(yīng)該在小激發(fā)光下進行明亮的、高反差的熒光觀察,。為了有效檢測到微弱的熒光信號,,必須降低雜散光的噪音。信噪比越高,,弱激發(fā)光下的觀察圖像越明亮,、越清晰。
- 增強信號的方法
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①高數(shù)值孔徑的熒光物鏡,。
②與單熒光波長特性相吻合的濾色片 - 降低噪聲的方法
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①無自發(fā)熒光的物鏡
②使用不產(chǎn)生熒光光譜交疊的激發(fā)和發(fā)射濾色片組合,。
③能阻止雜散光進入的光學系統(tǒng)
④能減少自發(fā)熒光的環(huán)形狹縫照明
熒光觀察組件
低自發(fā)熒光高信噪比物鏡 
①使用人員除了可以選擇PLAPON60XO 物鏡(出色的數(shù)值孔徑為1.42),還可以選用大量的其它高數(shù)值孔徑的物鏡,,這類物鏡自發(fā)熒光小,,精選玻璃,有助于提高信噪比,。
物鏡 | 數(shù)值孔徑 | 工作距離(mm) |
UPLSAPO 10X | 0.40 | 3.1mm |
UPLSAPO 20X | 0.75 | 0.6mm |
UPLSAPO 40X | 0.90 | 0.18mm |
UPLSAPO 60XO | 1.35 | 0.15mm |
UPLSAPO 100XO | 1.40 | 0.13mm |
PLAPON60 XO | 1.42 | 0.15mm |
UPLFLN40XO | 1.30 | 0.2mm |
LUCPLFLN 20X | 0.45 | 6.6 — 7.8mm |
LUCPLFLN 40X | 0.60 | 2.7 — 4mm |
LUCPLFLN 60X | 0.70 | 1.5 — 2.2mm |
用于熒光蛋白質(zhì)的高性能熒光組件 .gif)
?、谶@一熒光激發(fā)塊組件優(yōu)化了ECFP/EGFP/EYFP/DsRed波長特性,能夠提供高銳利的光譜分割和高透過率,,可以讓使用人員快速有效地從熒光蛋白中檢測到熒光,。即使在弱激發(fā)光下,,也能進行明亮觀察,從而減少了熒光衰減,,也大程度地減少了對樣品的損害,。
高性能干涉鍍膜熒光激發(fā)塊組件 .gif)
③由于采用了新的鍍膜技術(shù),,激發(fā)和發(fā)射之間的間隙減少6nm,,因此,某些干涉鍍膜熒光激發(fā)塊組件的信噪比也提高了,。這類熒光激發(fā)塊可有多種選擇,,其中包括新型的IGA型熒光激發(fā)塊組件。
高性能熒光激發(fā)塊
新型熒光激發(fā)塊中分光鏡的高銳化鍍膜將激發(fā)濾色片的交叉減少到小,,并且將激發(fā)光的損失減少到傳統(tǒng)模塊的十分之一以下,。與光線吸收裝置(可吸收99%以上的雜散光)組合使用,能夠提高信噪比,,而不需要任何防止激發(fā)光損失的設(shè)備,。
所有熒光激發(fā)塊組件都帶有雜散光降噪功能。
?、軓娫肼暤囊粋€來源是非常微弱的激發(fā)光(雜散光)不經(jīng)分光鏡反射就發(fā)生透射,。IX2系列熒光激發(fā)塊組件帶有可吸收99%以上這種雜散光的裝置。
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環(huán)形狹縫照明裝置,,降低了噪聲/IX2-RFRS
?、葑园l(fā)熒光產(chǎn)生于透鏡中心,導致光噪聲的產(chǎn)生,。但是,,這種自發(fā)熒光可以通過在反射光照明孔徑光闌上放一個環(huán)形狹縫來降低。這種環(huán)形狹縫只允許激發(fā)光通過物鏡孔(信噪比提高1.2到3倍),。這種裝置很容易安裝到IX2-RFAL上,,只需要簡單地更換環(huán)形狹縫裝置(視場數(shù)11),就可以兼容40X,、60X和100X油鏡,。
Illumination | Normal | Annular |
SIGNAL | 408 | 479 |
NOISE | 36 | 18 |
S/N | 11.3 | 26.6 |
玻璃反射器捕捉多重染色劑熒光 .gif)
⑥多帶分光鏡通常用于在激發(fā)和吸收一側(cè)使用濾色鏡轉(zhuǎn)盤時,,獲取多重染色熒光樣品的多色圖像,。但這種分光鏡會碰上這樣一個問題,那就是,,由于染色劑數(shù)目增加,,每種熒光圖像都會變暗,這是因為透過光譜變窄,透過率在狀態(tài)下也要降低到90%以下,。因此,,奧林巴斯公司開發(fā)了與波長無關(guān)的*的反射器,能夠在從430nm到700nm的寬波長范圍中具有94%的高透過率,。與激發(fā)和發(fā)射一側(cè)的濾色鏡轉(zhuǎn)盤共同使用時,,就可以使用多種染色劑,更有效地捕捉熒光圖像,?!?正在申請
熒光照明光源,明亮激發(fā)照明,,用于細胞觀察/操作
奧林巴斯系列熒光照明裝置適合廣泛的需要,,包括多重染色熒光、比例法測量(Ratio),、光漂白及解籠鎖(uncaging)觀察,。低放大倍率性能已經(jīng)大為提高,屬鹵化物系統(tǒng)帶有預對中的長壽命燈泡選項,。
Lamp housings |
Model | Asphericaloptics*1 | Apochromaticlens*2 | Averagelamp life | Lampcentering | IRillumination |
100W mercury apo lamp housing/ U-LH100HGAPO |  | | 300h | Required | Good |
100W mercury lamp housing/ U-LH100HG |  | | 300h | Required | Good |
75W xenon apo lamp housing/U-LH75XEAPO*3 | | | 200h | Required | Excellent |
50W metal halide lamp housing/ U-LH50MH | | | 2000h | Not required | N/A |
☆1 比起傳統(tǒng)消球差光學元件,能夠更有效集光,。
☆2 均勻照明,,燈泡聚焦不偏移,即使改變激發(fā)光波長,。
☆3 由于采用平坦光源光譜,,適合多重染色熒光或比例法成像。
多種反射光熒光照明器供選擇
[L形熒光照明器IX2-RFAL]
這種L形照明器比以前產(chǎn)品能夠提供兩倍亮度,,帶有可拆卸的孔徑和視場光闌插件,,還帶有能準確進行燈室對中的裝置,有著大的系統(tǒng)靈活性,。
[熒光照明器IX2-RFA]
比起以前產(chǎn)品,,在低放大倍率下,有著2.4倍的亮度(在10X物鏡下進行比較),。這種照明器對于需要強激發(fā)光的用途,,或者對于低放大倍率熒光觀察非常理想,內(nèi)置視場光闌,。
[雙光室照明器/IX2-RFAW]
同時使用兩個光源,,觀察時可以進行光增強。
[雙燈室附件U-DULHA]
這一適配器允許使用人員同時加裝不同類型的光源,,并根據(jù)用途交替使用,。
IX2-RFA用做反射光熒光照明器。
(光路選擇:100/0,,0/100,,視場數(shù)11)
照明器模塊組件
[方形視場光闌U-RFSS]
這種特的光闌允許使用人員在視場內(nèi)的任何地方控制一個熒光激發(fā)區(qū)域,。例如,光漂白和光毒性能夠僅*制在需要CCD成像的區(qū)域,,提高了整體亮度,,也延長了長時間觀察的細胞的壽命。這種光闌安裝在熒光照明器IX2-RFAL的視場光闌位置,。
[針孔光闌IX2-RFSPOT]
這種裝置能夠?qū)晒鈽悠诽峁c狀光照明,,對于許多實驗都是很有用的,如FRAP,,Uncaging等,。
這種光闌安裝在L形熒光照明器IX2-RFAL的視場光闌位置。
* 使用市售針孔板,。
紅外CCD適配器
這些低放大倍率CCD適配器安裝在左側(cè)光口,,覆蓋從可見光到近紅外光的波長范圍。
新的微分干涉(DIC)系統(tǒng)
諾馬爾斯基DIC 顯微鏡的簡單原理
光線穿過特殊媒介(例如,,水 )中帶有不同折射率的物質(zhì)(例如,,細胞)時,會產(chǎn)生相差,。諾馬爾斯基DIC 利用這種相差增強反差,。來自顯微鏡光源的光的波動方向與起偏器(聚光鏡側(cè))的光*,當其通過聚光鏡側(cè)的DIC 棱鏡時,,就分為直角正交的兩個束光,。分裂距離稱做裂劈間隙。當這兩束光線通過帶有不同折射率(例如,,細胞)的媒介時,,其中一束會發(fā)生延遲;而這兩束光被DIC 滑板(觀察筒側(cè))和檢偏鏡重組時,,干涉效應(yīng)就會產(chǎn)生反差,。這就是諾馬爾斯基DIC 的原理。
奧林巴斯公司已經(jīng)根據(jù)裂劈間隙為各種樣品開發(fā)出了理想的DIC 棱鏡,。當DIC 反差低時,,樣品很難觀察,由于有強烈眩光,,高反差也會干擾觀察,。因此,奧林巴斯公司開發(fā)了三種不同類型的DIC 棱鏡,,能夠?qū)Ω鞣N樣品進行清晰的觀察,。
諾馬爾斯基DIC系統(tǒng)在活細胞觀察中能夠提供佳分辨率或高對比度
活細胞樣品的厚度從C.elegans之類的線蟲到單層細菌細胞之間變化,這就需要DIC也能隨高反差的厚樣品或幾乎不可見的薄細胞而變化。奧林巴斯提供三種DIC 系統(tǒng),,每種的微分間隙都不一樣,。DIC 棱鏡在光通過時,微分間隙越大,,則終圖像的反差程度越大,。對于厚樣品,小斷層,、高分辨率裝置是非常*的,。對于非常薄的樣品,帶有雙倍普通微分間隙的高反差棱鏡則非常理想,。
根據(jù)樣品厚度和物鏡放大倍數(shù),,選擇佳的DIC 棱鏡。
·厚樣品(C.elegans)在不同微分間隙下的比較
薄樣品在不同裂劈間隙下的比較
新型DIC系統(tǒng)有著廣泛的選擇
可提供大量DIC兼容物鏡,。每種聚光鏡棱鏡都適合很多的透鏡,,安裝和配置更加容易。
長工作距離聚光鏡IX2-LWUCD
適合從10X到100X放大倍率下進行DIC觀察,。
特別是在20X到40X放大倍率下范圍內(nèi),,可以根據(jù)樣品厚度選用高反差或高分辨率。
浸水型DIC聚光鏡IX2-DICD
高性能DIC聚光鏡具有的光學性能設(shè)計,,用于在高放大倍率下方便地觀察樣品,。
為了能夠方便地觀察樣品,所有的調(diào)節(jié)裝置都安裝在前部,,包括棱鏡更換鈕和孔徑控制鈕??商峁┤N高數(shù)值孔徑的透鏡,,包括浸水型IX2-TLW,它的數(shù)值孔徑為0.9,工作距離為3.7mm,,操作器進入角度為40度,。
可聚焦的適配器IX-ADUCD
這一聚光鏡適配器允許在IX2上使用正立顯微鏡適配器,包括具有大系統(tǒng)靈活性的8孔轉(zhuǎn)盤式聚光鏡(U-UCD8),。
聚光鏡的光學元件轉(zhuǎn)換方法是轉(zhuǎn)盤系統(tǒng),,在使用高數(shù)值孔徑照明時,能夠進行平滑,、方便的轉(zhuǎn)換,,IX2照明柱還可以提供聚光鏡傾斜裝置,以迅速地觀察樣品,,而不必傾斜整個照明柱,。
滑動式載物臺IX2-GS
滑動式載物臺用于使用指尖迅速轉(zhuǎn)動樣品。X—Y軸行程為20mm,可轉(zhuǎn)動360度,,C.elegans線蟲之類的樣品就能迅速放到正確位置并排列好,,以用于注射或顯微操作。
浮雕相襯和相差的裝置
浮雕相襯(RC)裝置
奧林巴斯浮雕相襯系統(tǒng)能夠產(chǎn)生高反差的3D 圖像,,類似于DIC效果,,可用于塑料器皿中的樣品。浮雕相襯用于細胞受精,,使細胞核膜更容易看到和穿刺,。
浮雕相襯裝置
☆ 使每一物鏡的陰影方向*,提高不同倍率下的可操作性,。
☆ 聚光鏡(IX2-MLWCD)的長工作距離,,以免干擾操作器的工作。
用戶可以在兩個系列的浮雕相襯物鏡中選擇:高性價比的消色差物鏡或高分辨率,、高平場性及更好熒光性能的平場半復消色差物鏡,。浮雕相襯用的聚光鏡(IX2-MLWCD)也適用于DIC和相襯觀察。
相差觀察(PH)設(shè)備
超長工作距離聚光鏡IX-ULWCD,,用于相差和明場觀察,,工作距離長(73mm),能容下大容器,,有著*的可操作性,。應(yīng)該與4X-40X相差物鏡組合使用。相差觀察也可以使用IX2-LWUCD 聚光鏡進行,,它的工作距離是27mm,。