熒光顯微鏡的一個重要特點是它能夠探測到熒光的對象,，有時隱隱可見,，甚非常明亮與黑暗的背景（通常是黑色）,。為了優(yōu)化此功能,，使用的引物在該部分將要討論的原則,，圖像的亮度和分辨率必須大化,。

圖像亮度 - 優(yōu)化的圖像的亮度的重要的方面之一是,，以確保在每個連接到試樣的發(fā)色基團的適當(dāng)?shù)牟ㄩL,，樣品被提供用于激勵具有足夠的光能量。同樣重要的是,，選擇適當(dāng)?shù)膿醢鍨V光鏡,，向觀察管或攝像管發(fā)射的熒光的量大化。我們已經(jīng)組建了一個表列出的熒光激發(fā)和發(fā)射數(shù)據(jù),，這將有助于實現(xiàn)這一物鏡,。高能量的光源，如汞和氙氣的燃燒器,，將提供大量的激發(fā)能在非常窄的范圍的近紫外和可見光,。當(dāng)使用這些光源耦合到同時阻擋那些是不希望的，能夠發(fā)送所選波長的激發(fā)濾光鏡,，適當(dāng)?shù)剡x擇,，然后將滿足用于激發(fā)的佳標(biāo)準(zhǔn)。

擋板濾光鏡,，防止不需要的波長進入觀察管的選擇是一個主要問題,。激發(fā)的總能量是遠遠大于發(fā)射的能量，因此,，重要的是要選擇一個有效的擋板濾光鏡,，將阻止不必要的波長熒光發(fā)射，同時允許從樣品通過,。為熒光選擇的物鏡必須能夠有效地透射光,，在近紫外區(qū)域和在整個可見光譜。

在低發(fā)射的光水平的圖,，在熒光顯微鏡中的作用的物鏡是非常重要的,，因為它是收集來自樣本的光的物鏡的功能。物鏡所接受的光的錐角是由數(shù)值孔徑（NA）為物鏡來確定,，如在圖1中示出,。在透射光中的熒光顯微鏡，到達眼睛或其它檢測器的光的強度成正比作為物鏡和聚光鏡的總放大倍數(shù)的平方成反比的數(shù)值孔徑的平方,。

這種差異來作為物鏡的初功能作為一個聚光鏡,，用于在樣本上的光聚光，然后作為用于圖像形成的通常的光采集的結(jié)果,。其意義是顯而易見的：高數(shù)值孔徑物鏡會產(chǎn)生高得多的強度比相同的放大倍數(shù)較低的數(shù)值孔徑的物鏡圖像,。例如,，其他的事情都是平等的，40倍物鏡的NA為1.0將帶來超過5倍的亮度比40倍物鏡的數(shù)值孔徑為0.65的圖像,。進一步的含義是,，如果可能的話，低倍率的視覺目鏡（如8倍的放大倍率）也將增加圖像的亮度相比,，比較常用的10X觀察目鏡,。此外，在反射光中的熒光,，激發(fā)光被濃縮的物鏡（在其作為聚光鏡的功能）,，僅在被觀察的區(qū)域。其結(jié)果的激勵光的強度遠高于在透射光中的暗視野熒光,，其中被激發(fā)的面積不改變作為物鏡被改變,。此外，在暗視野,，物鏡的數(shù)值孔徑必須被減小到低于保存的視場的黑暗的聚光鏡,。

除了是一個重要的考慮因素的數(shù)值孔徑，這是可取的有高質(zhì)量的色差校正的物鏡,，因為聚焦在同一平面上的各種顏色,，將產(chǎn)生更清晰的圖像。另外,，更好的球面校正,，更清晰的圖像。因此中,，物鏡的選擇是平場復(fù)消色差物鏡或平場熒光物鏡,。的設(shè)計應(yīng)使這些透鏡元件及其水泥本身不會自動熒光時，低于400納米的波長（光在近紫外）光照射,。

在可能的情況下,，應(yīng)采用油浸物鏡，從載玻片和蓋玻片表面反射所造成的光損失減少到小?，F(xiàn)代顯微鏡商努力為客戶提供光學(xué)元件是*免費的自體熒光污染物，但是這方面也應(yīng)考慮自體熒光將減少通過增加背景亮度對比樣品,。

燈箱結(jié)構(gòu)