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      差速離心

    差速離心法是利用樣品中各種組分的沉降系數(shù)不同而進行分離的方法,，又稱差分離心或差級離心。通常兩個組分的沉降系數(shù)差在10倍以上時可以用此法分離,。在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：核,、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體,、之后為核蛋白體。

     差速離心是指低速與高速離心交替進行,，使各種沉降系數(shù)不同的顆粒先后沉淀下來,，達到分離的目的。沉降系數(shù)差別在一個或幾個數(shù)量級的顆粒,，可以用此法分離,。樣品離心時，在同一離心條件下,，沉降速度不同,，通過不斷增加相對離心力，使一個非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀,。操作過程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開,，然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心，分離出第二部分沉淀,，如此往復加高轉(zhuǎn)速,，逐級分離出所需要的物質(zhì)。差速離心方法較簡單,，但分辨率不高,，沉淀系數(shù)在同一個數(shù)量級內(nèi)的各種粒子不容易分開，常用于其他分離手段之前的粗制品提取,。

    在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：核,、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、之后為核蛋白體,。由于各種細胞器在大小和密度上相互重疊,，而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中，一般重復2～3次效果會好一些,。差速離心只用于分離大小懸殊的細胞,，更多用于分離細胞器。通過差速離心可將細胞器初步分離,，常需進一步通過密度梯離心再行分離純化,。

差速離心 - 優(yōu)點

    差速離心法的優(yōu)點是樣品的處理量較大，可用于大量樣品的初分離,。其缺點是分離復雜樣品和要求分離純度較高時,，離心次數(shù)多，操作繁雜,。由于沉淀的多次清洗,、溶解、再沉淀,，容易引起中間損失,，所以離心分辨力差。實際分離時由于離心時的對流,、擴散和收取沉淀時的污染,，對于一些沉降系數(shù)相差不大的組分無法進行*的分離提純。產(chǎn)品的純度和回收率都達不到上述理論值,。因此差速離心法主要用于大量樣品的初步分離提純,。