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ST-2000A霉菌毒素測定儀,、是當前,、酶聯(lián)免疫等分析的一種分析儀器。采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理,，即酶聯(lián)免疫法，由本儀器與B1試劑盒二大件組成,，能*,、定量測定樣品中黃曲霉毒素B1的含量(如配其他試劑盒，可測其他毒素),，廣泛應用于糧食,、食品,、飼料、油脂,、乳制品,、藥物、飲料,、酒等產(chǎn)品的黃曲霉毒素B1及其他霉菌毒素的檢測,。

性能特點：

1、顯示操作：彩色液晶屏,、可視話布板,、顯示整板信息、觸摸屏操作

2,、振板功能：3 級振板速度,、時間 0-255 秒可調(diào)

3、工 作 站：專業(yè)的酶標儀軟件,，可存儲 500 組程序,、100000 個 樣本結(jié)果，提供吸光度、線性方程,、對數(shù)方程,、二次方程、三次方程,、吸光度百分比-濃度對數(shù)方程,、樣條函數(shù)、抑制率等豐富的計算模式

技術(shù)參數(shù)：

光 源：DC12V  22W  進口鹵素燈

波長范圍：400-900nm

濾 光 片：標配 405,、450,、492、630nm,，其它波長可選配

讀數(shù)范圍：0-4.000Abs

分 辨 率：0.001Abs

示值誤差：≤±0.01Abs

穩(wěn) 定 性：≤±0.003Abs

重 復 性：≤0.3%

尺寸：400mm(L)*260mm(W)*200mm(H)       

 1 原理及用途

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測谷物,、飼料等樣品中的黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）,，試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板,、辣根酶標記物、抗體,、標準品及其他配套試劑組成,。檢測時，加入標準品或樣品溶液,，樣本中的黃曲霉毒素B1和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗黃曲霉毒素B1抗體,，加入酶標記物后，用TMB底物顯色,，樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素B1含量成負相關(guān),，與標準曲線比較即可得出樣本中黃曲霉毒素B1的殘留量。

2 技術(shù)指標

2.1 試劑盒靈敏度：0.03ppb(ng/ml)

2.2 反應模式：25℃,，30min～15min

2.3 檢測下限：

谷物……………………………………0.15ppb

配合飼料………………………………0.3ppb

食用油,、花生…………………………0.6ppb

醬類、麥類等飼料……………………0.3ppb

啤酒……………………………………0.3ppb

葡萄酒,、醬油,、醋……………………0.15ppb

2.4 交叉反應率：

黃曲霉毒素B1…………………………100%

 2.5 樣本回收率：

谷物及配合飼料……………………85%±15%

花生…………………………………82±15%

食用油………………………………85±15%

醬類、麥類等飼料………………83±15%

啤酒………………………………84±15%

葡萄酒,、醬油,、醋………………87±15%

3 試劑盒組成

酶標板……………………………96孔

標準液（黑蓋）：各1ml

0ppb、0.03ppb,、0.06ppb,、0.12ppb、0.24ppb,、0.48ppb

高標準液：100ppb…………………1ml

酶標記物（紅蓋）…………………5.5ml

抗體工作液（藍蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

說明書………………………………1份

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器：測定儀,、打印機,、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置,、振蕩器,、離心機、刻度移液管,、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：單道20µl-200µl,，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑：甲醇,、正己烷,、或二氯甲烷

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結(jié)果,。

5.2 配液：

配液1：樣品提取液

    70%甲醇，即V甲醇:V去離子水=7：3,。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 谷物處理方法 

1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,，加5ml樣品提取液，振蕩5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水,，混勻,；

3）取50μl進行分析。

    樣本稀釋倍數(shù)：5    檢測下限：0.15ppb

5.3.2 玉米皮,、麥麩等吸水性強的樣本處理方法 

1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,，加20ml樣品提取液，振蕩5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水,，混勻,；（對于毒素含量*的樣本可用35%的甲醇稀釋后再測。比如取2）中的混合液0.1ml加35%的甲醇0.9ml混勻,，最終樣本稀釋倍數(shù)為200,，檢測下限為6ppb。）

3）取50μl進行分析,。

樣本稀釋倍數(shù)：20    檢測下限：0.6ppb

注：由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài),，取樣時需多點取樣充分混勻后再取2g進行試驗。

5.3.3 配合飼料處理方法 

1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,，加10ml樣品提取液,，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取0.5ml上清,，加入0.5ml去離子水,，混勻；

3）取50μl進行分析,。

樣本稀釋倍數(shù)：10    檢測下限：0.3ppb

5.3.4 食用油,、花生、高油脂的飼料處理方法

1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,，加8ml正己烷和10ml樣品提取液,，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；

2）去除上層液體,，取0.5ml下層液體加入0.5ml去離子水，混勻,，再取混勻液體0.5ml加入0.5ml 35%甲醇,，振蕩30S；

3）取50μl進行分析,。

    樣本稀釋倍數(shù)：20    檢測下限：0.6ppb

5.3.5 醬類,、麥類、餅干,、糕點等食品或調(diào)料,，以及飼料濃縮料等飼料處理方法

1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加10ml樣品提取液,，振蕩5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取2ml上清,，加入4ml（或二氯甲烷）,，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；

3）轉(zhuǎn)移上層液體到另一容器中,，下層液留置備用，向上層液中再加入4ml（或二氯甲烷）,，充分振蕩混5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

4）去除上層液體,，合并兩次的下層液體并充分混勻,；

5）取合并后的下層液體2ml于50-60℃氮氣下吹干；

6）加入0.5ml樣品提取液充分溶解干燥物,，再加入0.5ml去離子水混勻,；

7）取50μl進行分析,。

    樣本稀釋倍數(shù)：10    檢測下限：0.3ppb

5.3.6 啤酒處理方法

1）將啤酒充分攪拌（去除CO2），取2ml啤酒樣品,，加入1ml蒸餾水,，再加入7ml甲醇，振蕩5分鐘,；

2）取混勻后的樣品液0.5ml加入0.5ml去離子水,，混勻；

3）取50μl進行分析,。

    樣本稀釋倍數(shù)：10    檢測下限：0.3ppb

5.3.7 葡萄酒,、醬油、醋處理方法

1）取2ml樣品,，加入2ml蒸餾水,，再加入10ml（或二氯甲烷），振蕩5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；

2）取下層液體1ml于50-60℃氮氣下吹干；

3）加入0.5ml樣品提取液充分溶解干燥物,，再加入0.5ml去離子水，混勻,；

5）取50μl進行分析,。

樣本稀釋倍數(shù)：5    檢測下限：0.15ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復到室溫以充分溶解,，每種液體試劑使用前均須搖勻,。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋,，保存于2-8℃,。

實驗開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液,。

6.1 編    號：將樣本和標準品對應微孔按序編號,，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置,。

6.2 加樣反應：加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,，然后加酶標記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液,，用蓋板膜封板,，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應30分鐘,。

6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干,，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒,，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）,。

6.4 顯    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl,，輕輕振蕩5秒混勻,，25℃避光顯色15分鐘。

6.5 終    止：每孔加入終止液50µl,，輕輕振蕩混勻,，終止反應。

6.6 測吸光值：用測定儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）,。測定應在終止反應后10分鐘內(nèi)完成

6.7 ST-2000A自動測定儀自動完成測定,，自動出結(jié)果。