等度液相色譜分析儀是一種常用的液相色譜分析儀器,，其工作原理是基于不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)分離的。在分離過程中,，流動(dòng)相攜帶樣品通過色譜柱,，樣品中的各組分在色譜柱上發(fā)生吸附、解吸,、擴(kuò)散等過程,，從而實(shí)現(xiàn)分離。分離后的組分依次進(jìn)入檢測(cè)器,，檢測(cè)器將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào),，最后由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行處理和分析。
等度液相色譜分析儀主要由輸液泵,、檢測(cè)器,、色譜柱,、進(jìn)樣系統(tǒng)以及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。其中,，輸液泵負(fù)責(zé)提供穩(wěn)定,、精確的流動(dòng)相；檢測(cè)器用于檢測(cè)樣品組分,；色譜柱則是分離樣品的關(guān)鍵部件,；進(jìn)樣系統(tǒng)負(fù)責(zé)將樣品注入色譜柱；數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)則負(fù)責(zé)收集,、處理和分析檢測(cè)數(shù)據(jù),。
等度液相色譜分析儀的操作步驟如下：
1,、準(zhǔn)備工作：
檢查儀器狀態(tài),，確保所有連接管路的連接緊固，檢查進(jìn)樣器,、檢測(cè)器和泵的工作情況,。確保試劑瓶中有足夠的溶劑，并檢查柱溫箱和樣品轉(zhuǎn)移系統(tǒng)的溫度設(shè)定,。
始終保持高效液相色譜儀器包括內(nèi)在系統(tǒng)的清潔,。室內(nèi)溫度始終保持恒定，因?yàn)槭覝氐淖兓瘜?duì)高效液相色譜檢測(cè)器有影響,。
2,、流動(dòng)相準(zhǔn)備：
將已經(jīng)過濾并脫氣的流動(dòng)相注入儲(chǔ)液罐。用流動(dòng)相沖洗金屬過濾器,，然后將過濾器浸入儲(chǔ)液罐的流動(dòng)相中,。
將儲(chǔ)液罐放置在一定的高度，以避免由于搬運(yùn)和其他操作人員的移動(dòng)而造成不必要的跌落,。
3,、啟動(dòng)儀器：
按以下順序依次啟動(dòng)高效液相色譜儀：泵→檢測(cè)器→高效液相色譜軟件→按預(yù)先計(jì)劃的方法設(shè)置軟件參數(shù)，如分析時(shí)間,、檢測(cè)波長(zhǎng),、流速等。
4,、系統(tǒng)排氣與基線穩(wěn)定：
啟動(dòng)泵,，運(yùn)行5分鐘，主要是為了排除系統(tǒng)中的氣泡,，結(jié)束后關(guān)閉所有排氣閥,。然后按照預(yù)先計(jì)劃的速度，以固定的速率（如1mL/min左右）運(yùn)行流動(dòng)相,，走基線,，直到基線平穩(wěn),，就可以在計(jì)算機(jī)軟件上進(jìn)行監(jiān)視。
5,、樣品準(zhǔn)備：
根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，?zhǔn)備好待分析的樣品。樣品準(zhǔn)備包括樣品提取和預(yù)處理,。提取要求根據(jù)分析物的特性選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，如溶劑萃取、固相萃取等,。預(yù)處理包括濾過,、稀釋、調(diào)整pH等步驟,，確保樣品符合分析要求,。
6、進(jìn)樣：
在進(jìn)樣之前,，需要通過洗滌進(jìn)樣針和管道以去除前一個(gè)樣品的殘留物,。進(jìn)樣體積和進(jìn)樣速度根據(jù)樣品的濃度和分析需要進(jìn)行設(shè)定。
7,、參數(shù)設(shè)置與進(jìn)樣分析：
基線平穩(wěn)后,，在軟件中設(shè)置樣品的運(yùn)行參數(shù)，如流速和分析時(shí)間等,。分析時(shí)間會(huì)因樣品,、流速、柱長(zhǎng)等因素變化,。
參數(shù)設(shè)置完畢后,，將固定體積的樣品溶液注入進(jìn)樣閥，然后在軟件中啟動(dòng)注入命令,，進(jìn)樣器中的樣品溶液就隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱,。
8、數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)與分析：
通過軟件監(jiān)視各項(xiàng)讀數(shù),，當(dāng)檢測(cè)器檢測(cè)到樣品所有峰值,，停止運(yùn)行并設(shè)置新的進(jìn)樣。在下一個(gè)樣品分析前,，建議留出5-10分鐘,，待流動(dòng)相通過色譜柱，以便清洗之前樣品的殘留物,；確認(rèn)基線穩(wěn)定后,，進(jìn)行下一次注射。
9,、結(jié)束操作：
分析結(jié)束后,，先關(guān)閉檢測(cè)器,，然后關(guān)閉泵，最后關(guān)閉軟件,。
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