革蘭氏染色液 NobleRyder C0360

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革蘭氏染色液

保質(zhì)期：2-8度一年.

革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,，媒染劑碘液進(jìn)入菌體后與結(jié)晶紫結(jié)合,，革蘭氏陽(yáng)性菌對(duì)碘與結(jié)晶紫攝取量多且牢固,，不易被酒精脫色,。革蘭氏陰性菌對(duì)碘與結(jié)晶紫攝取量少,，不牢固，易被酒精脫色,。為觀察方便,，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅進(jìn)行復(fù)染。陽(yáng)性菌仍帶紫色,，陰性菌則被染上紅色,。

操作步驟：

1、標(biāo)本處理：
（1）.有菌部位的標(biāo)本,，如痰液,、糞便、各種拭子,、創(chuàng)面等可直接涂片,。
（2）.無(wú)菌部位的標(biāo)本，如腦脊液,、胸水,、腹水、膽汁,、尿液,、關(guān)節(jié)液等，應(yīng)取適量標(biāo)本（zui高可達(dá)5-7ml）,經(jīng)3000rpm 離心10min.,，取沉渣涂片染色,。

2、涂片制作：菌液涂片時(shí),，用接種環(huán)沾取菌液點(diǎn)在載玻片上,，標(biāo)本可直接在玻片上涂布；菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水一滴,，置玻片上,，用接種針挑取菌落在鹽水中涂布。制作的涂片應(yīng)自然干燥,，并經(jīng)火焰固定,，固定的溫度不宜過(guò)高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn),，否則可能使細(xì)菌形態(tài)改變,。將固定后的涂片進(jìn)行染色。

3,、染色方法：

革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度,，如脫色過(guò)度，則陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌,；而脫色不夠時(shí)，陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌,。此外,，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),，或已死亡及部分菌自行溶解了,，都可能會(huì)呈陰性反應(yīng)。

（1）.加上結(jié)晶紫后,，染色1分鐘,，水洗。

（2）.加上碘液后染色1分鐘,，水洗,。

（3）.加上95%酒精,搖動(dòng)玻片,根據(jù)涂片厚度,脫色約30-60秒，水洗,吸去水分,。

（4）.加上蕃紅后,，染色1分鐘，水洗,。

（5）.吸干或在空氣中涼干后,，油鏡鏡檢。

4．結(jié)果觀察：紫色為革蘭氏陽(yáng)性,，紅色為革蘭氏陰性,。

注意事項(xiàng)：

1．標(biāo)本涂片不能太厚，嚴(yán)格按操作要求進(jìn)行,。

2．玻片通過(guò)火焰溫度不能太高,。

3．若涂片較厚，應(yīng)延長(zhǎng)脫色時(shí)間，直至不再出現(xiàn)紫色為止,。

4．碘液變透明,，則不能使用。

5.水洗時(shí)動(dòng)作要輕柔,沿載玻片對(duì)角線方向用洗瓶沖洗,以免把菌體沖掉,。

 革蘭氏染色液如果用量少,，買(mǎi)現(xiàn)成的比較話算，如果用量大,，自己配起來(lái)也溶液,，就是試劑種類(lèi)多了點(diǎn)。其配制方法如下：

（1）結(jié)晶紫（crystal violet）液：結(jié)晶紫乙醇飽和液（結(jié)晶紫2g溶于20mL95%乙醇中）20mL,，1%草酸銨水溶液80mL 將兩液混勻置24h后過(guò)濾即成,。

（2）盧戈（Lugol）氏碘液：碘0.33g，碘化鉀0.66g,，蒸餾水100mL,。先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中，然后加入碘使之*溶解,，再加蒸餾水至100mL即成,。配成后貯于棕色瓶?jī)?nèi)備用，如變?yōu)辄S色即不能使用,。

（3）95%乙醇：用于脫色,，脫色后可選用以下（4）或（5）的其中一項(xiàng)復(fù)染即可。

（4）番紅溶液：番紅O（safranine,，又稱(chēng)沙黃O）2.5g, 95%乙醇100mL,，溶解后可貯存于密閉的棕色瓶中，用時(shí)取20mL與80mL蒸餾水混勻即可,。

北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),，是一家專(zhuān)業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑,、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā),、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司,，公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等,；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑,、分子克隆相關(guān)試劑,、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器,。

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