北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)Western blotting檢測試劑盒（DAB） NobleRyder P0910量大優(yōu)惠,，咨詢 ：      1215878164

試劑盒組成
1. 封閉試劑：30g（可配制400ml）脫脂奶粉及其他蛋白,，緩沖鹽等混合物,。
2. 10倍濃縮抗體稀釋液,，50ml。
3. HRP標記二抗,，0.5ml,，效價1：400。
4. DAB顯色液（20×）,，5ml A+5ml B,。

原理：

SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離,，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后,，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),，再與酶標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色以檢測電泳分離的特異性的蛋白,。

操作步驟：

常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后,，
1） 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后，作好標記,，一般在左上角剪一缺口,。室溫用TBS-T漂洗3次每次5min,以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的SDS，防止影響后面的抗體結(jié)合。
2） 按5g封閉試劑加100ml雙蒸水計,，配制膜封閉液,，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉(zhuǎn)印膜,，封閉液內(nèi),，搖床震動，室溫封閉30min,。 A@ 3） 用TBS-T ,，PH7.6洗液，室溫漂洗3次每次5min,。
3）將10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成1×（10ml 10×抗體稀釋液加入90ml雙蒸水,，混勻，可4℃保存三個月）,。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液,。
4）用1×的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗,。將雜交膜放入雜交袋中,，加入一抗工作液，封口,，4℃孵育過液或37℃搖動孵育2h,。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同,，可在此步將膜沿電泳方向剪成條,，分別作好標記，分開孵育,。
5）用TBS-T ,，PH7.6洗液，室溫漂洗3次每次5min,。
6）用稀釋好的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量,，按10ml抗體稀釋液加入10ulHRP標記二抗的比例,，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中,，加入加入二抗工作液,，封口，4℃孵育過液或37℃搖動孵育2h,。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次,。
7）用TBS-T ，PH7.6洗液，室溫漂洗3次每次10min,。
8）配制DAB顯色：根據(jù)用量,，取TBS-T  4ml，加入DAB顯色液A,、DAB顯色液B各200ul,，混勻，加在膜正面,，室溫下顯色,。在目標條帶顯出后，而且背景未出時,，放入水中終止顯色,。

注意事項：
1，   請根據(jù)一抗來源選擇試劑盒,。括號里面代標一抗的來源而不是標本的來源,。
2，   western blotting DAB顯色法操作簡單,，但其敏感性與ECL發(fā)光發(fā)有一定的差距,，一般只適用于豐度較高的蛋白。
3,，   可以根據(jù)顯色結(jié)果來優(yōu)化實驗反應(yīng)時間,。如背景過深，可延長膜封閉時間,，加長zui終漂洗次數(shù)與時間,。如果條帶過弱，可延長抗體孵育時間,。
4,，   如果*沒有條帶，請檢查前期蛋白處理及實驗過程,， 如果確認無誤,，反復(fù)兩次依舊無結(jié)果，請換用ECL發(fā)光法顯色,。
5,，   TBS-T（0.01M）配制方法：稱取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ,，用800ml的雙蒸水溶解,，用鹽酸調(diào)PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20,，用雙蒸水 加至1000ml,，混勻即可,。（也可按照自己的配制習慣來配制）

北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專業(yè)從事生化試劑,、分子生物學試劑,、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)、銷售,、服務(wù)為一體的生物科技公司,，公司主要經(jīng)營的進口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料,、生化試劑,、分子克隆相關(guān)試劑、細胞培養(yǎng)及檢測常用試劑,、實驗室常用耗材及儀器,。

Western blotting檢測試劑盒（DAB） NobleRyder P0910

Western blotting檢測試劑盒（DAB） NobleRyder P0910