北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)線(xiàn)粒體提取試劑盒 NobleRyder P0940量大優(yōu)惠,，咨詢(xún) ：      1215878164

線(xiàn)粒體提取試劑盒使用說(shuō)明

 一,，試劑盒組份

二,，說(shuō)明

線(xiàn)粒體提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線(xiàn)粒體,。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的線(xiàn)粒體的制備,。其制備物產(chǎn)量高,，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞,、代謝和蛋白組學(xué)等的研究,。

三，操作步驟

1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱(chēng)取100~200 mg新鮮組織如肝臟,、腦,、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗,，洗凈血水,，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer,，0℃冰浴上下研磨組織20次,；

b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌,，800 × g 5~10 min離心收集細(xì)胞,。計(jì)數(shù)。每次提取需要5 × 10⁷個(gè)細(xì)胞,，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨30~40次,；

2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管,，4℃，1000× g 離心5 min,；

3. 取上清,，加入一新的離心管中，4℃,，1000× g 再次離心5 min,。

4．取上清，加入一新的離心管中,，4℃,， 12,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分,，可從中提取胞漿蛋白,。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線(xiàn)粒體沉淀在管底,；

5. 在線(xiàn)粒體沉淀中加入0.5 mL  Wash Buffer重懸線(xiàn)粒體沉淀，4℃,，1000× g 離心5 min,；

6．取上清，加入一新的離心管中,，4℃,， 12,000 × g 離心10 min。棄上清,，高純度的線(xiàn)粒體沉淀在管底,；

6. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線(xiàn)粒體沉淀，立即使用或-70℃保存,。

四 注意事項(xiàng)：
1. 為保證獲得完整的線(xiàn)粒體,，*是全程低溫操作。第二是快速。第三,，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞是制備線(xiàn)粒體的zui關(guān)鍵環(huán)節(jié),。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁,，因而要選用小容量玻璃勻漿器,、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度,，不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度,。
3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線(xiàn)粒體,。

五 儲(chǔ)存：四周內(nèi)使用可4℃儲(chǔ)存,，長(zhǎng)期置-20℃

轉(zhuǎn)速與離心力換算

G＝1.11×（10^-5）×R×[rpm]^２
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來(lái)表示,；

 [rpm] ^２即：轉(zhuǎn)速的平方,； R為半徑，單位為厘米,。

 北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),，是一家專(zhuān)業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑,、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā),、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司,，公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等,；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑,、分子克隆相關(guān)試劑,、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器,。

線(xiàn)粒體提取試劑盒 NobleRyder P0940

線(xiàn)粒體提取試劑盒 NobleRyder P0940