BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 NobleRyder P0030

北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 NobleRyder P0030量大優(yōu)惠,，咨詢 ：

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用說明

試劑盒組成 包裝（500微孔） 保存
 
BCA試劑 100ml 2-8℃
Cu試劑 3ml 2-8℃
PBS稀釋液 30ml 2-8℃
BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn) （5mg/ml BSA） 1ml  -20℃
 
 本試劑盒自訂購(gòu)之日起一年內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時(shí)可做500孔,。當(dāng)使用2ml比色皿時(shí)可做50孔,，如果是1ml比色皿時(shí)可做100孔,。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+,， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,，測(cè)定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度,。常用濃度的去垢劑SDS,，Triton X-100，Tween不影響檢測(cè)結(jié)果,，但受螯合劑（EDTA,，EGTA）、還原劑（DTT,，巰基乙醇）和脂類的影響,。實(shí)驗(yàn)中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,，可試用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒,。

使用說明

一，微孔酶標(biāo)儀法

1.         配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液,，充分混勻（混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后就會(huì)消失）,。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定,。

2.         稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml,。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2, 4,，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中,，加PBS補(bǔ)足到20微升,。

3.         將樣品作適當(dāng)稀釋（多做幾個(gè)梯度，如作2倍,、4倍,、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中,。由于移液器在取小量時(shí)的誤差,，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后,。

4.         各孔加入200微升BCA工作液,，37℃放置15-30分鐘。用酶標(biāo)儀測(cè)定A562nm,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度,。使用溫箱孵育時(shí)，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果,。

二,，分光光度計(jì)法、

如沒有酶標(biāo)儀，可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色,。

步驟如下：

1．配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻（混合時(shí)可能會(huì)有渾濁,，但混勻后就會(huì)消失）。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定,。

2,，  稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取100微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至1ml（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml,。

3,，  取八支（或者更多）5ml離心管，標(biāo)讓號(hào),，按下表加入試劑,。

離心管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7（樣品管1） 8（樣品管2） 9（樣品管3）
標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA 0 40ul 80ul 120ul 160ul 200ul 200ul適當(dāng)稀釋的樣品1 200ul適當(dāng)稀釋的樣品2 ……
PBS 200ul 160ul 120ul 80ul 40ul 0 0 0 0
BCA工作液 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
4，  37℃放置15-30分鐘,。用分光光度計(jì)測(cè)562nm處吸光值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。

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