革蘭氏染色液

保質(zhì)期：2-8度一年.

革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，媒染劑碘液進(jìn)入菌體后與結(jié)晶紫結(jié)合,，革蘭氏陽(yáng)性菌對(duì)碘與結(jié)晶紫攝取量多且牢固,，不易被酒精脫色。革蘭氏陰性菌對(duì)碘與結(jié)晶紫攝取量少,，不牢固,，易被酒精脫色。為觀(guān)察方便,，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅進(jìn)行復(fù)染,。陽(yáng)性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色,。

操作步驟：

1,、標(biāo)本處理：
（1）.有菌部位的標(biāo)本，如痰液,、糞便,、各種拭子、創(chuàng)面等可直接涂片,。
（2）.無(wú)菌部位的標(biāo)本,，如腦脊液、胸水,、腹水,、膽汁、尿液,、關(guān)節(jié)液等,，應(yīng)取適量標(biāo)本（zui高可達(dá)5-7ml）,經(jīng)3000rpm 離心10min.，取沉渣涂片染色,。

2,、涂片制作：菌液涂片時(shí)，用接種環(huán)沾取菌液點(diǎn)在載玻片上,，標(biāo)本可直接在玻片上涂布,；菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水一滴,，置玻片上,，用接種針挑取菌落在鹽水中涂布,。制作的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定,，固定的溫度不宜過(guò)高,，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能使細(xì)菌形態(tài)改變,。將固定后的涂片進(jìn)行染色,。

3、染色方法：

革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度,，如脫色過(guò)度,，則陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌；而脫色不夠時(shí),，陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌,。此外，菌齡也影響染色結(jié)果,，如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),，或已死亡及部分菌自行溶解了，都可能會(huì)呈陰性反應(yīng),。

（1）.加上結(jié)晶紫后,，染色1分鐘，水洗,。

（2）.加上碘液后染色1分鐘,，水洗。

（3）.加上95%酒精,搖動(dòng)玻片,根據(jù)涂片厚度,脫色約30-60秒,，水洗,吸去水分,。

（4）.加上蕃紅后，染色1分鐘,，水洗,。

（5）.吸干或在空氣中涼干后,，油鏡鏡檢,。

4．結(jié)果觀(guān)察：紫色為革蘭氏陽(yáng)性，紅色為革蘭氏陰性,。

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革蘭氏染色液如果用量少，買(mǎi)現(xiàn)成的比較話(huà)算,，如果用量大,，自己配起來(lái)也溶液，就是試劑種類(lèi)多了點(diǎn),。其配制方法如下：

（1）結(jié)晶紫（crystal violet）液：結(jié)晶紫乙醇飽和液（結(jié)晶紫2g溶于20mL95%乙醇中）20mL,，1%草酸銨水溶液80mL 將兩液混勻置24h后過(guò)濾即成,。

（2）盧戈（Lugol）氏碘液：碘0.33g，碘化鉀0.66g,，蒸餾水100mL,。先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中，然后加入碘使之*溶解,，再加蒸餾水至100mL即成,。配成后貯于棕色瓶?jī)?nèi)備用，如變?yōu)辄S色即不能使用,。

（3）95%乙醇：用于脫色,，脫色后可選用以下（4）或（5）的其中一項(xiàng)復(fù)染即可。

（4）番紅溶液：番紅O（safranine,，又稱(chēng)沙黃O）2.5g, 95%乙醇100mL,，溶解后可貯存于密閉的棕色瓶中，用時(shí)取20mL與80mL蒸餾水混勻即可,。