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吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色試劑盒 說(shuō)明書(shū)
最近更新時(shí)間：2016-4-29
提 供 商：北京諾博萊德科技有限公司資料大小：7.5KB
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
細(xì)胞凋亡(Apoptosis)的檢測(cè)方法有形態(tài)學(xué),、生物化學(xué),、DNA片段化檢測(cè)方法以及TUNEL等標(biāo)記片段化DNA方法，但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮,，使用顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察也是很重要的,。細(xì)胞死亡的檢測(cè)可以通過(guò)熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞,，測(cè)定細(xì)胞代謝活性和形態(tài)學(xué)觀察,。這些方法都是利用細(xì)胞凋亡這種情況進(jìn)行測(cè)定的，因而不一定反映實(shí)際情況,。MTT法是測(cè)定線粒體中*酶的活性,，反映細(xì)胞數(shù)目的變化，其結(jié)果不細(xì)胞死亡的數(shù)目未必*一致,。
吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料,，可以標(biāo)記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料,，AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)。AO與核酸結(jié)合方式主要有：1,、插入性結(jié)合,，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合,，其熒光収射峰為530nm,，激發(fā)后呈綠色熒光,；2、靜電吸引,，帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合,，這種結(jié)合方式主要為AO與 RNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為640nm,，激發(fā)后呈紅色熒光,，少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,，吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色,，與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)収橙紅色熒。
溴化乙錠(Ethidium Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對(duì)中,，無(wú)堿基特異性,，發(fā)紅色熒光。吖啶橙可透過(guò)活細(xì)胞膜,，EB不能通過(guò)與活細(xì)胞膜具有相同通透性的細(xì)胞膜,。
產(chǎn)品組成：
名稱/編號(hào) | D0839 100T | Storage |
試劑(A):AO solution | 200ul | 4℃ 避光 |
試劑(B):EB solution | 200ul | RT |
試劑(C):AO/EB Dilution Buffer | 50ml | 4℃ 避光 |
使用說(shuō)明書(shū) | 1份 | |
自備材料：
1、熒光顯微鏡
2,、PBS
3,、細(xì)胞計(jì)數(shù)板
4、載玻片,、蓋玻片
操作步驟(僅供參考)：
1,、AO/EB工作液的配制：取試劑(A)、試劑(B),、試劑(C),，按照試劑(A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8的比例稀釋成AO/EB工作液。
2,、每份細(xì)胞樣品中加入AO/EB工作液2μl,，混合均勻。
3,、低速離心：500g離心5min,，棄上清。
4,、用 AO/EB Dilution Buffer重懸細(xì)胞,，細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞密度調(diào)整為0.5~5×106個(gè)/ml,。
5,、每25μl細(xì)胞懸液中，加入1μl AO/EB工作液,，充分混勻,。
6,、取潔凈載玻片，滴加上5μl細(xì)胞懸液,，輕輕蓋上蓋玻片,。
7、在熒光顯微鏡B域進(jìn)行觀察,。
染色結(jié)果：
活細(xì)胞 | 綠色熒光 |
死細(xì)胞 | 橙色熒光 |
注意事項(xiàng)：
1,、用能通過(guò)活細(xì)胞膜與DNA結(jié)合發(fā)藍(lán)色熒光Hoechist 33342和只能通過(guò)死細(xì)胞與DNA結(jié)合后發(fā)紅色熒光的碘化吡啶(propidium iodide，PI)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙染的方法也比較常用,。
2,、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。
3,、操作過(guò)程中應(yīng)注意減少試劑(A),、試劑(B)暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。
4,、EB solution 有一定毒性,，請(qǐng)小心操作。
5,、為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期：6個(gè)月有效,。