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一管式口腔拭子DNA提取試劑盒
【產(chǎn)品簡介】
【詳細說明】
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PCR原理
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑,。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,,在DNA聚合酶的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝,。在實驗中發(fā)現(xiàn),,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈,。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,,加入設計引物,,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制,。
但是,,DNA聚合酶在高溫時會失活,因此,,每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶,,不僅操作煩瑣,而且價格昂貴,,制約了PCR技術的應用和發(fā)展,。
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,,不需要每個循環(huán)加酶,,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,,PCR技術得以大 taq酶[1]量應用,,并逐步應用于臨床。
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,,使之成為單鏈,,以便它與引物結合,為下輪反應作準備,;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合,;③引物的延伸:DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,,按堿基互補配對與半保留復制原理,,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈,重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板,。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘,,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
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