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士鋒葉綠素含量的測(cè)定
點(diǎn)擊次數(shù)：783 發(fā)布時(shí)間：2017-9-27
一,、原理
根據(jù)葉綠體色素提取液對(duì)可見光譜的吸收,，利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度，即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量,。根據(jù)朗伯—比爾定律,，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常數(shù),。當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位,，液層厚度為1cm時(shí)，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù),。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)可通過(guò)測(cè)定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的吸光度而求得,。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長(zhǎng)下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長(zhǎng)下吸光度的總和,。這就是吸光度的加和性,。今欲測(cè)定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量,，只需測(cè)定該提取液在三個(gè)特定波長(zhǎng)下的吸光度A,，并根據(jù)葉綠素a,、b及類胡蘿卜素在該波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測(cè)定葉綠素a,、b時(shí)為了排除類胡蘿卜素的干擾,，所用單色光的波長(zhǎng)選擇葉綠素在紅光區(qū)的zui大吸收峰,。
二、材料,、儀器設(shè)備及試劑
（一）材料：新鮮（或烘干）的植物葉片,。
（二）儀器設(shè)備：1. 分光光度計(jì)；2. 電子頂載天平（感量0.01g）,；3. 研缽,；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗,；6. 定量濾紙,；7. 吸水紙；8. 擦境紙,；9. 滴管,。
（三）試劑：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂,；碳酸鈣粉,。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 取新鮮植物葉片（或其它綠色組織）或干材料,，擦凈組織表面污物,，剪碎（去掉中脈），混勻,。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g,，共3份，分別放入研缽中,，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇,，研成均漿，再加乙醇10ml,，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3～5min,。3. 取濾紙1張,，置漏斗中,，用乙醇濕潤(rùn),，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過(guò)濾到25ml棕色容量瓶中,，用少量乙醇沖洗研缽,、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，zui后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?. 用滴管吸取乙醇,，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中,。直至濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色為止。zui后用乙醇定容至25ml,，搖勻,。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95％乙醇為空白,，在波長(zhǎng)665nm,、649nm下測(cè)定吸光度。
四,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算：將測(cè)定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.9665－6.88A649,；Cb=24.96A649－7.32A665。據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca,、Cb：mg/L）,，二者之和為總?cè)~綠素的濃度。zui后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量：
葉綠素的含量（mg/g）= [葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重（或干重）,。