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96孔板鋪板的小技巧
最近更新時(shí)間：2013-2-26
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剛開(kāi)始用96孔板種細(xì)胞時(shí)細(xì)胞總是分布不均勻，第二天就會(huì)發(fā)現(xiàn)有些地方出現(xiàn)堆積性生長(zhǎng),，而還有不少地方細(xì)胞則很稀疏，細(xì)胞密集的地方因細(xì)胞與細(xì)胞之間的接觸抑制影響細(xì)胞的生長(zhǎng),，這樣就很難評(píng)價(jià)干預(yù)因素對(duì)細(xì)胞的作用，因此將96孔板種均勻也是進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)的前提,，現(xiàn)將我以前用的老辦法和zui后用的新方法比較一下，以讓大家看看各自?xún)?yōu)缺,。
1老方法：種過(guò)板子后,，用手將96孔板平拿起,，左右晃動(dòng)幾下,，然后再前后晃動(dòng)幾下，不過(guò)這種方法5個(gè)復(fù)孔中總有2-3個(gè)孔中細(xì)胞分布不均勻,，多數(shù)情況下是孔的中間出現(xiàn)成堆分布，為此苦惱了一陣子,。還又一次見(jiàn)一師姐將種好的板子放在搖床上搖了幾分鐘，結(jié)果更慘了,，細(xì)胞全部跑到中間了。
一般96孔板我每孔是加100微升細(xì)胞懸液,，從孔的左邊靠近底部加入，加完半邊板后,，將未加的細(xì)胞懸液混一下再，繼續(xù)加剩余的半邊板子,，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊,，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下）,，太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好）,，依次敲擊剩余三個(gè)邊，靜置約5分鐘,，放入37度培養(yǎng)箱,。
2新方法：這種方法簡(jiǎn)直是太好了,，種的很均勻。先用移液槍將吹打均勻的細(xì)胞吸起來(lái),，讓后將槍頭緊貼著孔的一側(cè)壁（注意槍頭的尖不要接觸孔底），然后將槍頭中的細(xì)胞緩緩的打下去,，種好之后千萬(wàn)不要搖晃板子,，直接放到顯微鏡下看就可以了，此方法可以說(shuō)是100%的有效吧,。 希望對(duì)大家有幫助,。
補(bǔ)充：從6孔板到96空板要細(xì)胞分散均勻，先用培養(yǎng)基把細(xì)胞稀釋好,，再把培養(yǎng)板放在適當(dāng)?shù)奈恢?，加入?xì)胞時(shí)和加入細(xì)胞后不移動(dòng)培養(yǎng)板;如果空中有的地方?jīng)]有培養(yǎng)基可吹打，但不要移動(dòng)培養(yǎng)板,，加入細(xì)胞后靜置20-30分鐘再移入培養(yǎng)箱,。這樣細(xì)胞一般都能長(zhǎng)的很均勻。當(dāng)然,，前提是細(xì)胞消化的很好,。