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動植物組織mRNA提取
最近更新時間：2017-8-28
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：40KB
文件類型：JPG 圖片下載次數(shù)：193次
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一,、材料
水稻葉片或小鼠肝組織,。
二、設(shè)備
研缽,，冷凍臺式高速離心機(jī),，低溫冰箱，冷凍真空干燥器,，紫外檢測儀,，電泳儀，電泳槽,。
三,、試劑
1、無rna酶滅菌水：用將高溫烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小時）裝蒸餾水,，然后加入0.01%的DEPC（體積/體積）,，處理過夜后高壓滅菌,。
2、75%乙醇：用DEPC處理水配制75%乙醇,，（用高溫滅菌器皿配制）,，然后裝入高溫烘烤的玻璃瓶中，存放于低溫冰箱,。
3,、1×層析柱加樣緩沖液；20mmol/L Tris·Cl(pH7.6),，0.5mol/L NaCl,，1mmol/L EDTA(pH8.0)，0.1% SDS,。
4,、洗脫緩沖液：10mmol/L Tris·Cl (pH7.6)，1mmol/L EDTA (pH8.0),，0.05% SDS,。
四、操作步驟
（一）動植物總RNA提取-Trizol法
Trizol法適用于人類,、動物,、植物、微生物的組織或培養(yǎng)細(xì)菌,，樣品量從幾十毫克至幾克,。用Trizol法提取的總RNA*蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑點(diǎn)分析,，斑點(diǎn)雜交,， Poly(A)+分離，體外翻譯,，RNase封阻分析和分子克隆,。
1、將組織在液N中磨成粉末后,，再以50-100mg組織加入1ml Trizol液研磨,，注意樣品總體積不能超過所用Trizol體積的10%。
2,、研磨液室溫放置5分鐘,，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入，蓋緊離心管,，用手劇烈搖蕩離心管15秒,。
3、取上層水相于一新的離心管,，按每mlTrizol液加0.5ml異丙醇的比例加入異丙醇,，室溫放置10分鐘,，12000g離心10分鐘。
4,、棄去上清液,，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，渦旋混勻,，4℃下7500g離心5分鐘,。
5、小心棄去上清液,，然后室溫或真空干燥5-10分鐘,，注意不要干燥過分，否則會降低RNA的溶解度,。然后將RNA溶于水中，必要時可55℃-60℃水溶 10分鐘,。RNA可進(jìn)行mRNA分離,，或貯存于70%乙醇并保存于-70℃。