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細胞生長的ATP檢測
最近更新時間：2016-10-31
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>14.3KB
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1．ATP反應(yīng)液（Bio-Orbit）是粉末狀混合物,，含有熒光素、熒光素酶,、0.5mmol醋酸鎂,、50mg BSA和0.1μmol無機焦磷酸。在4℃可以保存1個月,。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸緩沖液稀釋,。稀釋液分裝后可在－20℃長期保存。
2．在已經(jīng)完成促增殖或抑生長試驗后的96孔細胞培養(yǎng)板中（每孔含100μl細胞培養(yǎng)液）,，每孔加0.1ml ATP釋放因子,，室溫中反應(yīng)5分鐘。取另一塊96孔細胞培養(yǎng)板,，從*塊板的各孔中吸0.1ml細胞溶解物到第二塊板的相應(yīng)各孔,。
3．在低于25℃中，將第二塊板置自動多孔熒光檢測儀中,。用自動加樣器,，每孔加入20μl atp反應(yīng)液，立即檢測10秒鐘的熒光強度,。溫度升高,，檢測敏感性就下降。
4．用RLU（Y軸）對細胞因子標準品的稀釋度（X軸）作標準曲線,，根據(jù)標準曲線確定待測樣品中細胞因子的含量,。