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外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌介紹
最近更新時間：2016-7-12
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轉(zhuǎn)化是將外源DNA分子通過物理或化學(xué)的方法導(dǎo)入基因工程細菌中的過程,是基因工程等研究領(lǐng)域的基本實驗技術(shù)之一.
外源質(zhì)粒dna轉(zhuǎn)化大腸桿菌
1實驗簡介
轉(zhuǎn)化是將外源DNA分子通過物理或化學(xué)的方法導(dǎo)入基因工程細菌中的過程,是基因工程等研究領(lǐng)域的基本實驗技術(shù)之一.現(xiàn)演示利用化學(xué)的方法(熱擊法)：使用化學(xué)試劑(如CaCl2)制備的感受態(tài)細胞,通過熱擊處理將載體DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌細胞中.
實驗中使用的主要儀器：電熱恒溫水槽超凈工作臺臺式離心機電熱恒溫震蕩器電熱恒溫培養(yǎng)箱
2熱擊
DNA連接產(chǎn)物與大腸桿菌感受態(tài)細胞冰浴30min后,放置42攝氏度水浴鍋中,熱擊90秒,后迅速將大腸桿菌轉(zhuǎn)移到冰水中放置2-3min.
3大腸桿菌復(fù)蘇
上步熱擊后,一般都要對菌體進行一次復(fù)蘇過程,向熱擊加入600-800ul37攝氏度預(yù)熱的無抗生素lb培養(yǎng)基后,置于搖床上37氏度,150rpm復(fù)蘇培養(yǎng)45～60min.
4涂板培養(yǎng)
復(fù)蘇后,收集的菌體去除部分上清液,預(yù)留100ul左右的菌液懸浮,用移液槍將重懸的菌加到抗性固體LB培養(yǎng)基中,用涂棒將菌涂布均勻,37攝氏度倒置培養(yǎng)12小時.