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士鋒對PCR擴增產(chǎn)物分析
最近更新時間：2015-9-18
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1、凝膠電泳分析
PCR產(chǎn)物電泳,，EB溴乙錠染色紫外儀下觀察,，初步判斷產(chǎn)物的特異性。PCR產(chǎn)物片段的大小應(yīng)與預(yù)計的一致,，特別是多重PCR,，應(yīng)用多對引物，其產(chǎn)物片斷都應(yīng)符合預(yù)訐的大小,，這是起碼條件,。瓊脂糖凝膠電泳通常應(yīng)用1～2%的瓊脂糖凝膠，供檢測用,；聚丙烯酰胺凝膠電泳時,，6～10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好，條帶比較集中,，可用于科研及檢測分析,。
酶切分析：根據(jù)PCR產(chǎn)物中限制性內(nèi)切酶的位點,，用相應(yīng)的酶切,、電泳分離后，獲得符合理論的片段,，此法既能進行產(chǎn)物的鑒定,，又能對靶基因分型，還能進行變異性研究,。
2,、分子雜交
3、Southern印跡雜交： 在兩引物之間另合成一條寡核苷酸鏈(內(nèi)部寡核苷酸)標(biāo)記后做探針,，與PCR產(chǎn)物雜交,。此法既可作特異性鑒定,，又可以提高檢測PCR產(chǎn)物的靈敏度，還可知其分子量及條帶形狀,，主要用于科研,。
4、斑點雜交： 將PCR產(chǎn)物點在硝酸纖維素膜或尼膜薄膜上,，再用內(nèi)部寡核苷酸探針雜交,，觀察有無著色斑點，主要用于PCR產(chǎn)物特異性鑒定及變異分析,。
5,、核酸序列分析：是檢測PCR產(chǎn)物特異性的zui可靠方法。