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免疫電泳實(shí)驗(yàn)
最近更新時(shí)間：2015-5-13
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免疫電泳（immunoelectrophoresis ）是將電泳和瓊脂擴(kuò)散結(jié)合起來(lái),，用于分析抗原組成的一種定型方法，具有靈敏快速的優(yōu)點(diǎn),。該實(shí)驗(yàn)可分為如下兩個(gè)步驟：
1.電泳 將待檢的可溶性物質(zhì)在瓊脂板上進(jìn)行電泳分離,。由于各種可溶性蛋白分子的大小,、質(zhì)量與所帶電荷不同，在電場(chǎng)的作用下,，其帶電分子的運(yùn)動(dòng)速度具有一定的規(guī)律,，因此通過(guò)電泳能夠把混合物中的各種不同成分分離開(kāi)。
2.瓊脂擴(kuò)散 電泳后在瓊脂槽中加入相應(yīng)抗血清,，然后置濕盒內(nèi)進(jìn)行雙擴(kuò)散,。當(dāng)抗原與抗體相遇且比例適合時(shí)，可形成不溶性復(fù)合物,，出現(xiàn)特異性沉淀線,，根據(jù)沉淀線的數(shù)量和位置，可鑒定分析各種抗原成分及其性質(zhì),。
【材料】
1.抗原：正常人血清,；抗體：兔抗人血清。
2.1% 離子瓊脂（用離子強(qiáng)度 0.05 ,、pH8.6 的巴比妥緩沖液配制）,。
3.載玻片、直徑 3mm 的打孔器,、2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料條,、微量加樣器、電泳儀,、吸管等,。
【方法】
1.制瓊脂板 載玻片放于水平臺(tái)面上，將塑料條放置于玻片中央,，吸取 4ml 熱熔的 1% 離子
瓊脂于其上,，待凝固后，取出塑料條,，即制成瓊脂槽,。再按圖 6-2 打孔。
2.加樣 用微量加樣器往孔中加正常人血清,。
3.電泳 電壓 4V/cm ,，電泳 1.5 小時(shí)。
4.瓊脂擴(kuò)散 在瓊脂槽內(nèi)加入兔抗人血清,，使其充滿槽內(nèi),，置濕盒內(nèi) 3 7 ℃ 擴(kuò)散 24 小時(shí)，觀察結(jié)果,。
【結(jié)果觀察】
在瓊脂槽的兩邊出現(xiàn)相對(duì)稱的弧形沉淀線,。
【注意事項(xiàng)】
1.電泳擴(kuò)散后可直接在黑色背景下，用斜射光觀察,。
2.電泳時(shí),，搭橋應(yīng)*緊密接觸,，以免因電流不均而發(fā)生沉淀線彎曲。
【作業(yè)】
1.繪瓊脂板上弧形沉淀線圖,。
2.為什么免疫電泳法比免疫瓊脂雙向擴(kuò)散法靈敏,？