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正常人外周血白細胞的分離
最近更新時間：2014-12-4
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常人外周血白細胞的分離
一,、自然沉降法
正常人外周血紅細胞與白細胞的比例約為6000～1000:1，兩類細胞的沉降速度不同,，進行正常人外周血白細胞分離,。
1 、試劑及配制
1）無Ca2+ ,、Mg2+ Hank’s液,。
2）含10%～20% 滅活小牛血清Hank’s液。
2 ,、操作方法
1）取靜脈血2ml,，放入加有抗凝劑的試管中，輕輕混勻,。
2）將試管直立靜置于室溫或37℃溫箱中30～60min,，待紅細胞自然沉降。此時可見試管中的懸液分3層,，上層為淡黃色血漿,，底層為紅細胞，在緊貼紅細胞層上有一呈灰白色的白細胞層（正常人外周血白細胞）,。
3） 用毛細管吸取位于紅細胞層上面的富含白細胞的細胞懸液,，移入另一試管中；
4） 加入無Ca2+ ,、Mg2+ Hank’s液至離試管口3cm處,，混勻，以水平離心機2000r/min 離心10min,，棄上清,，同法在洗滌兩次。
5）沉淀細胞用適量10%～20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸,，計數(shù),，配成所需的細胞濃度的懸液，一般常用2×106 /min,。
二,、加速紅細胞沉降法
利用高分子量的聚合物促使紅細胞凝聚成串錢狀,，從而加速紅細胞沉降，使之與白細胞分離,。常用的高分子聚合物有明膠,、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及甲基纖維素等,。
1 ,、試劑及配制
1）3%明膠（粘度為25泊以上）：選取明膠，用生理鹽水配成3%溶液,，置沸水浴加熱溶解,，分裝，高壓蒸汽滅菌8磅15～20min,。
2）6%右旋糖酐（分子量200～400KD）：用生理鹽水配制,。
2 、操作方法
1）取抗凝靜脈血加入等量3%明膠鹽水或6%右旋糖酐溶液中,，混勻,。
2）將試管直立靜置室溫或37℃溫箱中30～60min，利用明膠與紅細胞的粘合作用,，促使紅細胞快速下沉,，而白細胞留在明膠溶液中。
3）用毛細吸管吸取富含白細胞的上層液,，移入另一試管中,。
4）加入無Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液至離試管口3cm處,，混勻,，以水平離心機2000r/min 離心10min，棄上清,，同法在洗滌兩次,。
5）沉淀細胞用適量10%～20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸，計數(shù),，配成所需的細胞濃度的懸液,，一般常用2×106 /min。
三,、正常成人白細胞正常值
1 ,、白細胞數(shù)值
成年人外周血液中正常的白細胞數(shù)值是4～10×10g/L，如果少于4×10g/L為白細胞減少,，超過10×10g/L及為白細胞增多,。
正常值范圍：（單位為×109 個/L）
（1）成人為4.0-10.0
（2）新生兒為15-20
（3）6個月到2歲為11-12
（4）4到14歲為8
2 、白細胞分類計數(shù)
在外周血液中可以看到的白細胞,，一般可分：中性粒細胞,、嗜酸性粒細胞,、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞,、單核細胞等五種,。其中以中性粒細胞zui多，其次為淋巴細胞,，其他的白細胞很少。所謂白細胞分類計數(shù)就是計算各種白細胞在它的總數(shù)中所占的百分比數(shù),。
正常值為：中性粒細胞：50～70%
嗜酸性粒細胞：0.5～5%
嗜堿性粒細胞：0～1%
淋巴細胞：20～40%
單核細胞：1～8%