QQ交談
您所在位置：請輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://sorrent.com.cn/st236594/
膠質(zhì)細胞培養(yǎng)
最近更新時間：2014-10-29
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
文件類型：PNG 圖片下載次數(shù)：615次
資料類型：未知文件瀏覽次數(shù)：1463次
取材及膠質(zhì)細胞的混合培養(yǎng)
1,、P2 SD大鼠經(jīng)低溫麻醉后以碘酒和75％乙醇消毒,，無菌操作下，斷頭放入預(yù)冷的D-Hanks液中,，在解剖顯微鏡下取大腦皮層并除去腦膜,。
2、剪碎組織成1mm3大小,，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱內(nèi)消化20min,，中間搖晃一次。
3、隨后用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的MEM＋10％FBS（Glial Medium,，GM）的離心管內(nèi)終止消化液作用5min,。
4、吸出組織轉(zhuǎn)移到另一支裝有冷的GM的離心管內(nèi),，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數(shù)次,，靜置后取上清并吸到另一支離心管內(nèi)。重復(fù)上述步驟2～3次,。
5,、所得上清于800r/min離心5min，棄上清,，管內(nèi)加入新鮮GM并吹打成單細胞懸液,。細胞計數(shù)，調(diào)整細胞密度按1.5×105/cm2種入25cm2培養(yǎng)瓶,，放入孵箱培養(yǎng),。以后每隔2～3d進行全量換液。
搖床振搖分離星形膠質(zhì)細胞和寡突膠質(zhì)細胞
培養(yǎng)至7～10天,，換液后放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)24h,，取出擰緊培養(yǎng)瓶蓋，于37℃恒溫搖床上280r/min搖動18h,。此時寡突膠質(zhì)細胞90％以上在培養(yǎng)懸液內(nèi)而與瓶底貼壁的星形膠質(zhì)細胞分離,。
分離培養(yǎng)懸液內(nèi)的寡突膠質(zhì)細胞
吸出懸液至離心管內(nèi)950r/min離心10min，棄上清后管內(nèi)加入新鮮GM,，吹打成單細胞懸液,，按1.5×105/cm2種入預(yù)先用100μg/L多聚賴氨酸包被好的35mm培養(yǎng)皿培養(yǎng)。24h后換成DF12＋N2的無血清培養(yǎng)液,，此后每三天半量換液1次,。
瓶底星形膠質(zhì)細胞的繼續(xù)培養(yǎng)
25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)的星形膠質(zhì)細胞用D-Hanks液洗2次后常規(guī)傳代，以1.5×105/cm2種入預(yù)先用100μg/L多聚賴氨酸包被好的35mm培養(yǎng)皿培養(yǎng),。培養(yǎng)液為GM,，每三天半量換液1次。