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血清使用過程中應注意的問題
最近更新時間：2014-10-27
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
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一,、關于血清使用的幾點建議：
1,、血清必須貯存-20℃，如存放于4℃,，請勿超過兩周,，對于某些單位一次無法用完一瓶，可在無菌條件下將其40-45ml分裝于無菌50ml離心管中(或血清瓶中),，由于血清解凍時體積會增加10％,，必須預留此膨脹體積的空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂的情形,。
2,、一般公司所提供的血清一般為200ml和500ml裝量，因此建議在使用中宜采取逐步解凍的方法解凍血清：-20℃→4℃冰箱或冷庫溶解24小時→室溫下全溶后再分裝,，一般以50 ml無菌離心管中分裝40-45ml,。使用過程中要特別注意，必須規(guī)則地將血清搖晃均勻,，小心勿造成氣泡,，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。勿直接由-20℃放置至37℃環(huán)境下解凍,，因為溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而產(chǎn)生沉淀,。
3,、血清的滅活(heat-inactivation)一般是指56℃，30分鐘水浴加熱已*解凍的血清,，加熱過程中必須規(guī)則地搖晃均勻,。此處理的目的是使血清中的補體成分(complement)去活化。但是,，經(jīng)過滅活處理的血清會因而造成沉淀的顯著增多,，且會影響血清的品質,。所以，有的公司所生的細胞培養(yǎng)用牛血清不做滅活處理,，由客戶自行選擇,。而診斷試劑用血清在除菌過濾前進行過滅活處理。
4,、在使用血清的時候,，勿將血清留置于37℃太久，血清會變得混濁,，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分會因而受到破壞,，影響血清的品質。
5,、一般我們在使用過程中是先過濾培養(yǎng)基,，再加血清，勿直接過濾血清,。
6,、血清的沉淀物：
(1)凝絮物：其產(chǎn)生的原因有多種，但普遍的原因是血清中的脂蛋白(lipoprotein)變形及解凍后血清中存在的纖維蛋白(fibrin)造成,，這些凝絮沉淀物不會影響血清本身的品質,。除非必須，如果您想減少這些沉淀物,，建議可用離心3000rpm，5min去除,，或離心后取上清液加入培養(yǎng)基中一起除菌過濾,。
(2)顯微鏡下觀察“小黑點”，通常經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會顯著增多,。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為是血清遭受污染(如黑膠蟲),，而將血清放置在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,，但37℃環(huán)境下，又會使此沉淀物增多,，更會誤認為微生物的增殖,，但以培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基檢測，又沒有污染,。一般而言,，此小黑點不會影響細胞的生長。
二,、血清質量的決定因素：
1,、關于牛種：
血清質量與牛種沒有必然的,，但有其先天條件。
首先,，澳大利亞,、新西蘭的牛源之所以被*為，原因是這些國家的牛源是“無污染”的,，“無污染”的實際含義是：病毒等外源因子污染較少,。至于美國，由于其國內出現(xiàn)了瘋牛病,，其形象由此受到挑戰(zhàn),。這種血清安全性的觀念在發(fā)達國家認知度較高，而在我國還不夠重視,。其次,，牛所能獲得的營養(yǎng)對血清質量有影響。在我國,，由于飼養(yǎng)條件的不同,，不同地區(qū)產(chǎn)的血清質量是有差異的。
2,、質量標準件的問題：
我國對人用生物制品生產(chǎn)所用的牛血清制定了國家標準,，載于《中國生物制品主要原輔材料質控標準》2000年版，此標準已接近于國外胎牛血清的有關標準,。內毒素：國家標準件為不高于10Eu/ml,，內控標準件為不高5Eu/ml或10Eu/ml。國家標準之外的質控指標還有：免疫球蛋白,、牛腹瀉病毒(BVDV)抗體,、激素、和牛源安全性驗證等,。
3,、牛血清的命名和選擇：
一般公司對細胞培養(yǎng)用牛血清的命名分二類：胎牛血清和小牛血清。對于一般的細胞系,，小牛血清可以培養(yǎng)得很好,。
三、關于牛血清白蛋白的生產(chǎn)工藝：
牛血清白蛋白的制備方法有Cohn's法,、鹽析法,、熱變性法等多種工藝。不同的生產(chǎn)工藝其產(chǎn)品的名稱,、質量指標,、應用領域等各不相同。
其中Cohn's法設備、工藝要求比較高,，相對應的生產(chǎn)成本較高,，但產(chǎn)品質量較好。牛血清組份V(FrationV)就是由Cohn's法制備的,。一般白蛋白純度96-99%,、外觀潔白、結晶性狀好,、1%蛋白水溶液PH7.0±0.2,，再根據(jù)不同的應用分成低內毒素、低脂肪酸等等的不產(chǎn)品,，主要應用于細胞培養(yǎng)領域的無血清培養(yǎng)基中,。鹽析法因生產(chǎn)周期長，純度低和產(chǎn)品聚合體高,、穩(wěn)定性低等缺陷已很少應用,。
目前國內應用比較普遍的是熱變性法，結合較先進的超濾生產(chǎn)工藝,，其工藝要求相對較低,，制備成本低，其缺點是目前應用領域比較單一,，僅供免疫診斷試劑使用,。