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細(xì)胞傳代培養(yǎng)
最近更新時(shí)間：2014-10-9
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
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一,、原理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后,，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）,。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程,。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
二,、材料和試劑
1,、細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株
2、試劑：0.25％胰酶,、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）
3,、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱,、培養(yǎng)瓶,、吸管、廢液缸等
三,、操作步驟
1,、將長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。
2,、加入0.5—1ml 0.25％胰酶溶液,，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3,、瓶口塞好橡皮塞,，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移,，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,，在還未漂起時(shí)將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化,。
觀察消化也可以用肉眼,，當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘,。
4,、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中,，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
附：消化液配制方法：
稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250）,，加入100ml無(wú)Ca2+,、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過(guò)濾除菌,，4℃保存,，用前可在37℃下回溫。胰酶溶液中也可加入EDTA,，使zui終濃度達(dá)0.02％,。