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細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用檢測法
最近更新時間：2014-9-9
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>50.6KB
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1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)液將K562細(xì)胞配成1×105/ml濃度,。用同樣培養(yǎng)液將PBMC配成1×106/ml濃度。
2．取96孔圓底細(xì)胞培養(yǎng)板,，每孔加0.1ml K562細(xì)胞懸液,；每孔加適量PBMC使效靶比為1：1～5：1，每種處理3個復(fù)孔,；3個對照孔只加效應(yīng)細(xì)胞,；8個對照孔只加靶細(xì)胞；4個對照孔只加細(xì)胞培養(yǎng)液,。每孔加20μl Alamar Blue,；每孔總量為0.2ml。
3．在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時,。
4．直接在熒光檢測儀上檢測熒光強度,，激發(fā)波長530nm，發(fā)射波長590nm,。各孔熒光強度值應(yīng)減去培養(yǎng)液對照熒光強度的平均值,，各復(fù)孔熒光強度的平均值記為AF。按下式計算特異性殺傷百分比：
特異性殺傷（％）＝100×