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肝細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
最近更新時(shí)間：2014-9-1
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
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取新鮮肝臟,，先剝除被膜和血管等纖維成分,，用刀或剪刀把肝臟剪成1mm3左右的小塊，采用帖壁培養(yǎng)法,。
初代消化法培養(yǎng)：
1．把肝組織切成2～4立方毫米的小塊,，用不含鈣鎂的BSS液洗兩次。
2．移入1：1的0.1％胰蛋白酶和0.1％膠原酶（都用無鈣鎂BSS配置）中,，4℃冷消化10～12小時(shí)后,，通過250微米和64微米尼龍網(wǎng)或不銹鋼紗網(wǎng)濾過。
3．收集細(xì)胞,、BSS液洗1～2次,、計(jì)數(shù)、接種培養(yǎng),。
消化培養(yǎng)肝細(xì)胞的另一種方法是灌流法,；肝臟灌流需用全肝，以較小動(dòng)物如小鼠和大鼠為好,。
1．無菌解剖動(dòng)物,，取出肝臟，先用BSS洗除血污,。
2．取5ml注射器一支,，吸取消化液后，把注射器頭輕輕插入肝管中,，用線繩結(jié)扎牢固,，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入肝管系統(tǒng),，并不時(shí)輕揉壓肝臟,，以便消化液進(jìn)入肝小葉中；消化液在肝內(nèi)停留20～30分后,，在吸出消化液的同時(shí)并輕揉壓肝臟,，以使肝細(xì)胞脫落和消化液吸出。
3．待吸凈消化液后,，注入離心管中，低速離心分離,，用RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)（較其它培養(yǎng)基為好）,，能獲得較純的肝上皮細(xì)胞和獲較好的效果,。
傳代培養(yǎng)：
待細(xì)胞生長連接成片后，用BSS洗一二次,，加1：1的0.025％胰蛋白酶和0.02％ EDTA混合消化3～5分鐘,，待細(xì)胞回縮，便停止消化,，棄掉消化液,，用BSS洗一二次，注入營養(yǎng)液,，吹打,，制成細(xì)胞懸液，再接種培養(yǎng),。