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士鋒生物動物細胞融合
最近更新時間：2014-8-6
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細胞融合指的是兩個或兩個以上的細胞合并成一個細胞的現(xiàn)象,，在自然情況下,，受精過程及某些病變組織中的多核細胞均屬于融合現(xiàn)象。1961年Barski在研究中觀察到組織培養(yǎng)體細胞融合現(xiàn)象,。1962年Okada首先成功地用仙臺病毒誘導(dǎo)了細胞融合,，此后引起了不少學(xué)者研究細胞融合地興趣。30多年來,，細胞融合技術(shù)有了很大進步，如在動物或植物種內(nèi)或種間的細胞雜交,，甚至在動物細胞和植物細胞之間的細胞雜交等方面取得了很多的成果,。目前，細胞融合技術(shù)已經(jīng)成為研究細胞遺傳、細胞工程,、細胞免疫和腫瘤等的重要手段之一,。
一、目的與要求
了解細胞融合的原理及初步掌握的細胞融合的方法,。
二,、原理
在人工條件下，只有在某些誘導(dǎo)物（如仙臺病毒,、聚乙二醇等）的誘導(dǎo)下,，使親本細胞膜發(fā)生一定的變化，才能使兩個或多個或更多的細胞融合,。細胞融合過程,，首先是在誘導(dǎo)物的作用下出現(xiàn)細胞凝集現(xiàn)象。然后,，在細胞粘連處發(fā)生融合,，而成為多核細胞。zui后,，經(jīng)有絲分裂,，細胞核進行融合，遂形成新的雜種細胞,。
用人工方法誘導(dǎo)的細胞融合可形成兩種類型的雙核或多核細胞,，由同一親本的細胞融合形成的細胞稱之為同核體（homocaryons），由不同親本細胞融合形成的則稱之為異核體（heterocaryons）,。細胞融合后的多核細胞大多只能存活一段時間（約十幾日）就相繼死亡,，而只有雙核的異核體才能存活下來。存活下來的異核體經(jīng)有絲分裂,，染色體合并在一個細胞核內(nèi),，形成雜種細胞。
為便于雜種細胞的篩選,，細胞融合時所用的親本細胞中,，其中一個常選用能在體外增殖但有酶缺陷的細胞，如缺乏次黃嘌呤鳥便嘌呤核糖基轉(zhuǎn)移酶（HPRT）或核苷激酶（TK）,。而另一親本細胞則選用離體后不能再生增殖的細胞,。將這兩種細胞進行融合后，用HAT培養(yǎng)基培養(yǎng),。后一種親本的未融合細胞和同核體由于離體后不能生長而死亡,。前一種親本的未融合細胞和同核本（離體細胞能在全養(yǎng)培養(yǎng)基中生長增殖）由于HAT培養(yǎng)基中所含的氨基喋呤可阻斷其DNA合成的主要途徑，而這種細胞又因為缺乏HP－RT和TK不能利用培養(yǎng)基中的外源核苷酸原料（次黃嘌呤）而死亡,。因而只有經(jīng)過融合的異核體（雜種細胞）,，由于酶的補償作用,，能在HAT培養(yǎng)基中生存，從而被篩選出來,。
三,、實驗內(nèi)容
1、細胞融合
2,、融合細胞的識別
四,、實驗步驟
（一） 脊椎動物細胞融合
0. 混合兩種親本細胞
取小鼠腹腔巨噬細胞或雞紅血球懸液1ml(107細胞/ml),IB-RS-2細胞1ml(106細胞/ml)注入5ml具塞尖底離心管中，混和兩種親本細胞后,，取出混和液0.2ml,，用生理鹽水稀釋5倍，作對照,。