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去壁低滲法制備植物染色體標(biāo)本
最近更新時(shí)間：2014-7-30
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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
掌握用去壁低滲法制備植物染色體標(biāo)本的技術(shù),。
二,、實(shí)驗(yàn)原理
低滲法原為人類和哺乳動(dòng)物染色體標(biāo)本的制備方法，后引用于植物,。植物根尖分生組織細(xì)胞,，經(jīng)果膠酶和纖維素酶處理后，其中膠層的果膠質(zhì)及纖維素構(gòu)成的細(xì)胞壁被消化,，成為游離的原生質(zhì)體,。然后用低滲溶液處理，使細(xì)胞核中的染色體,，向細(xì)胞質(zhì)中自然擴(kuò)散,，經(jīng)固定、火焰干燥,、染色,，即可制備出染色體長(zhǎng)度適中、集中而不重迭,、各部分形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰的優(yōu)良染色體標(biāo)本,。避免了壓片法的缺點(diǎn)，特別適于染色體小且多的植物,。
三,、實(shí)驗(yàn)材料
各種植物種子均可用。
四,、實(shí)驗(yàn)器具和藥品試劑
顯微鏡,、溫箱、冰箱,、培養(yǎng)皿,、鑷子、小瓶,、載玻片,、酒精燈、切片架,。
秋水仙素、KCL,、2.5％的果膠酶和纖維素酶混合液,、甲醇、冰醋酸,、Giemsa原液,、磷酸緩沖液,。
五、實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 材料培養(yǎng) 種子在恒溫條件下發(fā)芽培養(yǎng),，待根尖長(zhǎng)至0.5～1厘米時(shí)進(jìn)行前處理,。
(二) 前處理 切取0.5厘米長(zhǎng)的根尖，用0.2％秋水仙素處理2小時(shí),，或用 0.002M 8-羥基喹啉處理2～4小時(shí),。
(三)前低滲 吸干預(yù)處理液，滴入0.075M KCL溶液,，在室溫下處理30分鐘,，其中更換低滲液兩次。
(四)去壁 吸干低滲液,，用蒸餾水洗一次,，滴入2.5％果膠酶和纖維素酶混合液，以全部材料浸沒為度,，加蓋,，在30℃條件下處理2～5小時(shí)，其中將材料瓶輕輕搖動(dòng)數(shù)次,，促使酶反應(yīng)充分,。
(五)后低滲 吸干酶液(將酶液放到另一棕瓶置冰箱內(nèi)保存，可反復(fù)使用),，用蒸餾水慢慢洗2次,，然后在蒸餾水中靜止10～20分鐘，進(jìn)行后低滲,。
(六)固定 吸干蒸餾水,，加入新配制的甲醇 ：冰醋酸(3：1)固定液3毫升。
(七)制片 取根尖1～3個(gè),，放在清潔的載片上,，加一滴固定液，用鑷子將根尖挾碎,，如太干,，可再滴一滴固定液再行挾碎，去掉殘?jiān)?nbsp;
(八)火焰干燥 將載片在酒精燈焰火上微微烘烤,。
(九)染色 用10％Giemsa染液染20分鐘,，也可用改良苯酚品紅染色液染色。
(十)鏡檢 將載片水洗后稍干,，用顯微鏡找出分散好的染色體中期分裂相,。