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PCR技術(shù)的*性與局限性
最近更新時間：2014-7-24
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聚合酶鏈反應(yīng)即PCR技術(shù)，因為其對基因或特定核酸序列在短時間內(nèi)的極大的擴增效率,，已在感染性疾病,、腫瘤、遺傳病,、寄生蟲病,、法醫(yī)學(xué)、動植物和考古等的診斷和研究中得到了廣泛的應(yīng)用,，并在某些方面幾乎是難以替代的,。但是，像自然界的任何事物一樣,，PCR也有其局限性,，稍不注意，就很容易造成錯誤的判斷。
遺傳基因的異?？芍逻z傳病的發(fā)生,，人類遺傳病約有3000多種，患者占總?cè)丝跀?shù)的10%,。遺傳病一般可分為單基因,、多基因及染色體遺傳病。這些遺傳病通常是由于基因突變,、基因缺失,、染色體錯位所致。以前常用的診斷方法有家系譜分析,、染色體檢查(特別是顯帶法),、生物化分析等。現(xiàn)PCR技術(shù)由于其對基因體外擴增快速靈敏的特點,，結(jié)合其他多種分子生物學(xué)手段可以檢出大部分已知的基因突變,、基因缺失、染色體錯位等,，應(yīng)可成為遺傳病診斷的zui有效,、zui可靠的方法之一。
法醫(yī)學(xué)也因為PCR技術(shù)的出現(xiàn),，進入到了分子物證的時代,，并可以到個體確認水平，其在分子水平上對血斑,、精斑,、毛發(fā)、組織碎片乃至微量殘留細胞等法醫(yī)物證的確認,，遠較以前的血清學(xué)方法確實可靠,，如以前的血型鑒定，只能是排除不同血型者,，而無法做到個體確認,。并且PCR因為其極大的擴增效率，可以對極少量物證,，如一根毛發(fā),、一滴血液、極小精斑,、體液中的脫落細胞等進行分析,，從而確定個體?？梢哉f，當代法醫(yī)鑒定在個體鑒別上已離不開PCR技術(shù)。
*,，腫瘤與遺傳有關(guān),，除已知的單基因遺傳腫瘤，如視網(wǎng)膜細胞瘤,、腎母細胞瘤等以外,，幾乎所有的腫瘤細胞中都可以觀察到原癌基因的重排，這些基因的變化常導(dǎo)致細胞增殖與凋亡失控,，zui終形成腫瘤,。pcr擴增檢測技術(shù)，使癌基因和抑癌基因及其狀態(tài)的檢測,，變得簡便,、快捷而又容易。此外,，使用反轉(zhuǎn)錄PCR檢測特定腫瘤抗原的mRNA,，很容易監(jiān)測到癌轉(zhuǎn)移的發(fā)生。
PCR這種基因擴增技術(shù)因其簡單易行,，應(yīng)用現(xiàn)已極為廣泛,，但其影響因素很多，如標本或核酸純化過程中出現(xiàn)的擴增反應(yīng)抑制物,、擴增儀孔間溫度的差異以及核酸提取中的隨機誤差,，可造成假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。又如,，以前擴增產(chǎn)物的污染和核酸提取中標本間的交叉污染,，也很容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。因此,，PCR臨床應(yīng)用必須要有嚴格的實驗室分區(qū),、實驗室管理和質(zhì)量控制措施，只有在充分了解PCR測定的不確定性的基礎(chǔ)上,，采取相應(yīng)質(zhì)控措施,，才能確保實驗結(jié)果的準確性，而不致出現(xiàn)重大判斷失誤,。因為PCR擴增,，其得到極大的檢測靈敏度，但同時其對檢測中的錯誤也有極大的放大作用,。因此,，對于pcr檢測結(jié)果的報告必須慎重，尤其是在該結(jié)果會產(chǎn)生重大后果的時候,，如重大感染性疾病,、遺傳病,、法醫(yī)物證鑒定、親子鑒定等,，必須在有相應(yīng)嚴格質(zhì)控措施(如內(nèi)質(zhì)控,、陰性和陽性質(zhì)控)的情況下重復(fù)測定，才可以報告結(jié)果,，并做出實事求是的解釋,。