QQ交談
您所在位置：請輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機(jī)：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://sorrent.com.cn/st236594/
士鋒生物PCR反應(yīng)五大要素
最近更新時間：2014-7-23
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
文件類型：PNG 圖片下載次數(shù)：115次
資料類型：未知文件瀏覽次數(shù)：690次
參加pcr反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶,、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度,。理論上,，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增,。
設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右,。
②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜,，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜,，G+C太少擴(kuò)增效果不佳,，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ),，特別是3'端的互補(bǔ),，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,，特別是zui末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對,，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn),， 這對酶切分析或分子克隆很有好處,。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol,，以zui低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會,。