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技術(shù)文章
DNA目的片段的回收方法
點擊次數(shù)：1112 發(fā)布時間：2016-6-30
一,、原理
回收目的片段的方法很多,，常用的有凍融法，低熔點瓊脂糖法,，透析代法,、電泳回收法、玻璃孔回收法等,。本實驗采用電泳回收法,。通過特別的 V 形電泳槽，將挖出的含有目的片段的凝膠置于 V 形槽前,，接通電泳電源,， DNA 即進入 V 形管中，回收 V 形管中溶液即可,， V 形管較小,，回收的 DNA 片段能保持較高的濃度。
二,、實驗步驟
1. 大量酶切產(chǎn)物的電泳分離：瓊脂糖為 0.8 %,，選用大型電泳槽及厚梳子,，并載低電壓下電泳以提高分辨率。
2. 紫外燈下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝膠,。
3. 把凝膠片置于特制的 V 型槽平臺上,，在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 電泳緩沖液(使其剛好淹過膠面)，再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ,，接通電源進行電泳,。
4. 紫外燈下檢測凝膠塊是否含有 DNA ，判斷 DNA 是否全部進入 V 形管溶液中,。
5. 當(dāng) DNA 進入 V 形管中,，放掉電泳槽中的緩沖液，吸出 V 形管中的溶液,。
6. 溶液加兩倍體積的*,，混勻，置- 70 ℃ 兩小時或者- 20 ℃
7.1200rpm 離心 10 分鐘,，沉淀用 70 %酒精洗一次,，風(fēng)干，加入 10ul 與 8ul TE 及 1ul 載樣緩沖液混合,，電泳檢查并根據(jù)帶的亮度估算其濃度,。
三、注意事項
挖含目的 DNA 的凝膠時,，盡量減少周圍凝膠的帶入,。