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DNA抽提標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程
點(diǎn)擊次數(shù)：975 發(fā)布時間：2016-1-14
1 目的：DNA抽提標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)范適用于HLA試驗(yàn)中的DNA抽提操作,。
2 適用范圍：DNA抽提實(shí)驗(yàn)室
3 依據(jù)： DNA抽提標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)范
4 引用文件：德國BAG公司（以下簡稱BAG） 《Instructions for use EXTRA-GENE I》
5 程序
5.1試劑準(zhǔn)備
5.1.1 BAG® EXTRA-genE I
該試劑盒包括3部分：Solution 1 、Solution 2,、Solution 3
使用前,，若Solution 2有沉淀請將其在37℃孵育，直至沉淀*溶解
5.1.2 乙醇溶液，濃度（V/V）為96%或100％
5.1.3 乙醇溶液,，濃度（V/V）為70%
5.1.4 滅菌蒸餾水,，按照滅菌蒸餾水配制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范
5.2儀器及用具準(zhǔn)備
5.2.1 移液器，規(guī)格：20µl – 200µl,、200µl – 1000µl
5.2.2 移液器配套吸頭,，規(guī)格：200µl和1000µl，滅菌,、無DNA/RNA殘留
5.2.3 Eppendorf離心管,，規(guī)格：1.5mL 或2.0 mL ，滅菌
5.2.4 混勻器
5.2.5 離心機(jī)（至少13,，000 rpm,，）
5.2.6 水浴箱
5.2.7 DNA濃度測定儀（DNA單位為ng/µl，可提供A260/280）
5.2.8 試管架（每排24孔）
5.2.9 手套規(guī)格：乳膠手套,，與操作者手形相適應(yīng),，經(jīng)滅菌
5.3操作步驟：
5.3.1 換工作服、戴手套
5.3.1.1 從工作服衣柜中換取工作服,，戴上適應(yīng)自己手形的乳膠手套,。
5.3.2 血樣檢查
5.3.2.1 血樣應(yīng)在-20℃保存，保存時間不應(yīng)超過1年,，無溶血,、血樣保存容器無破裂、無滲漏,、容器蓋子無松動等現(xiàn)象,。
5.3.2.2 核對血樣記錄與捐獻(xiàn)者記錄，確定血樣是否有效,，只有有效捐獻(xiàn)者記錄的血樣才能用于試驗(yàn),。
5.3.2.3 血樣量至少1 mL。
5.3.2.4 選取滿足以上要求的24個血樣作為一組抽提標(biāo)本,。
5.3.2.5 若血樣本是凍存的,，請將血樣在室溫下孵育至其*解凍。
5.3.3 DNA抽提
5.3.3.1 將選取的24個血樣按照編號的順序依次放置在試管架上,，每排12個,，共2排,。在記錄本上按順序記錄樣品號,、抽提日期、抽提者等,。
5.3.3.2 取24個1.5mLEppendorf離心管,，依次放置在試管架上，每排12個，共2排,，與血樣一一對應(yīng),，并在離心管上用油性記號筆標(biāo)上對應(yīng)血樣的號碼。