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動(dòng)植物樣品的采集及DNA樣品的提取
點(diǎn)擊次數(shù)：996 發(fā)布時(shí)間：2015-12-28
7.1.動(dòng)物樣品的采集及處理方法
遺傳學(xué)數(shù)據(jù)在野生動(dòng)物和圈養(yǎng)動(dòng)物的保護(hù)和管理中變得日益重要,。在本文中，我們總結(jié)了一些能簡(jiǎn)便而有效地獲得樣品及數(shù)據(jù)的方法,。
我們?cè)诓杉瘶悠分?，?duì)將要進(jìn)行的遺傳學(xué)分析有所了解。然而,，采集者并非都是研究者,，當(dāng)采集地與實(shí)驗(yàn)室有相當(dāng)距離時(shí)，采集者常常要保存好樣品直到有合適的接受者或存放地,，這就要求采集者應(yīng)具備一定的經(jīng)驗(yàn),。
首先，所有樣品均應(yīng)以個(gè)體序號(hào)進(jìn)行標(biāo)注,，并且應(yīng)寫(xiě)上種名,、性別、采樣者姓名以及采集日期,，越詳盡越好,，以便同一個(gè)體的不同類數(shù)據(jù)可以相互引用，另外,，地理來(lái)源的標(biāo)注也很重要,，需要注明。對(duì)于野外捕獲的動(dòng)物,，有條件者在地圖上標(biāo)明捕獲地及其經(jīng)緯度,。對(duì)圈養(yǎng)動(dòng)物的每個(gè)野外捕獲種源都要有同樣的記錄和詳盡的譜系圖，因?yàn)樽V系圖可用于計(jì)算近交系數(shù),。
總之,，背景資料越詳細(xì)越好，即使不能得到這里所列的全部信息,，也要盡可能詳盡,。
7.l．1 樣品的測(cè)量方法
在一定數(shù)量的分類群中采用的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法可用于以下四個(gè)方面：
（1）分類學(xué)上：一套理想的測(cè)量方法應(yīng)能大致上重建機(jī)體每個(gè)主要硬件部分的形狀和大小。
（2）不對(duì)稱性分析：機(jī)體各部分的起伏不對(duì)稱,，也許表明進(jìn)化過(guò)程在一定程度上正在變得不穩(wěn)定,，這可能是環(huán)境壓力或近交的結(jié)果。測(cè)量不對(duì)稱時(shí)機(jī)體左右兩部分均應(yīng)考慮在內(nèi),。
（3）遺傳變異：在科級(jí)水平上,，如果對(duì)同一年齡的個(gè)體采用同樣的測(cè)量方法，就有可能對(duì)所選特征中的遺傳成分變異進(jìn)行粗略的估計(jì),。雖然并非總是能做到這樣,，但能使遺傳學(xué)家對(duì)所選特征（如生殖特征方面遺傳變異的任何丟失）進(jìn)行監(jiān)視。
（4）生理檢測(cè)或記錄：采用標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法得到的記錄，也許會(huì)有助于與用其他手段得到的數(shù)據(jù)起來(lái)分析,。例如,，如果有了精子形態(tài)的記錄，或是特殊寄生物的感染記錄,，遺傳學(xué)家就能因此尋找在不同群體中這些因素與變異水平的相關(guān)性,。
7.1．2 組織樣品的采集和保存
表7-1 列出了常用的組織在遺傳學(xué)研究中的用途。下面詳細(xì)給出針對(duì)不同研究目的的適當(dāng)方法,。當(dāng)然,，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有各自習(xí)慣的組織處理方法，因此,，本文僅給出快速保存的有關(guān)要求,，但對(duì)每種組織的可用性都有所評(píng)述，以便在用途有沖突時(shí),，能對(duì)潛在數(shù)據(jù)的可能應(yīng)用作出迅速判斷,。
注：表中數(shù)字代表正文中敘述的方法。數(shù)字“1”即代表正文7．1．2．1 中的方法,，數(shù)字“2”即代表正文7．1．2．2中的方法,。其余依此類推。
使用腫瘤,、毛發(fā)及精子樣品,，保存時(shí)應(yīng)特別注意。使用細(xì)胞培養(yǎng)樣品可減少對(duì)活體或新殺動(dòng)物的依賴,，如果培養(yǎng)物來(lái)源于腫瘤組織細(xì)胞,，則可大量減少對(duì)同種動(dòng)物組織的進(jìn)一步需求。組織材料必須在數(shù)小時(shí)內(nèi)送到有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或用于其他的細(xì)胞培養(yǎng),。如果已經(jīng)知道DNA 序列的一小部分,，就可利用PCR 技術(shù)從很少一部分組織中擴(kuò)增DNA，從而使極其的樣品（如一根毛發(fā)或單個(gè)精子）具有更高的利用價(jià)值和更大的可信度,。
組織必須取自活體動(dòng)物或死后1～2 分鐘內(nèi)的動(dòng)物,，并且要快速保存起來(lái)，除非出現(xiàn)下述情況：在野外條件或是匆忙安排的活體取樣,，因此沒(méi)有時(shí)間同實(shí)驗(yàn)室,。此時(shí)要有目的地?cái)U(kuò)大采集和儲(chǔ)存量。如果已經(jīng)詳細(xì)知道樣品的確切用途,，則有時(shí)條件可以放寬,。例如，對(duì)血液樣品來(lái)說(shuō),，有些酶是不要求立即凍存的,。
每一種組織的制備和保存方法均列在表7-1 中,，表中同時(shí)列出了每種樣品的用途?？焖賰龃鏁r(shí)樣品可放人液氮,、干冰中或直接放入－70℃冰箱。凍存樣品可在—70℃液氮,、冰箱、干冰或－20℃冰箱中保存和運(yùn)輸,。樣品凍存及運(yùn)輸均以放入液氮中效果較好,。非凍結(jié)冰箱是不能用的。