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焦磷酸測序(Pyrosequencing)技術(shù)
點擊次數(shù):971 發(fā)布時間:2015-9-16
焦磷酸測序(Pyrosequencing)技術(shù)是新一代DNA序列分析技術(shù),該技術(shù)無須進(jìn)行電泳,DNA片段也無須熒光標(biāo)記,,操作極為簡便。
Pyrosequencing技術(shù)是由4種酶催化的同一反應(yīng)體系中的酶級聯(lián)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)(參見Pyrosequecing的原理),,在每一輪測序反應(yīng)中,只加入一種dNTP,,若該dNTP與模板配對,,聚合酶就可以將其摻入到引物鏈中并釋放出等摩爾數(shù)的焦磷酸基團(tuán)(PPi)。
PPi可zui終轉(zhuǎn)化為可見光信號,,并由PyrogramTM轉(zhuǎn)化為一個峰值,。每個峰值的高度與反應(yīng)中摻入的核苷酸數(shù)目成正比。然后加入下一種dNTP,,繼續(xù)DNA鏈的合成,。
焦磷酸測序(Pyrosequencing)技術(shù)瑞典Pyrosequencing AB公司基于Pyrosequencing技術(shù)而研究開發(fā)的PSQ 96系統(tǒng)是一個理想的遺傳分析技術(shù)平臺,它既可進(jìn)行DNA序列分析,,又可進(jìn)行基于序列分析的SNP檢測及等位基因頻率測定,。我公司是早引進(jìn)PSQ 96 MA 技術(shù)平臺的公司之一,它具有以下優(yōu)點:
不需要制膠,,不需要毛細(xì)管,,也不需要熒光染料和同位素。 10分鐘內(nèi)可分析96個樣品的snp,,可滿足高通量分析的要求,。 每個樣品孔都可進(jìn)行獨立的測序或SNP分析,實驗設(shè)計靈活,。 序列分析簡單,,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
Pyrosequencing技術(shù)的原理
Pyrosequencing是一項全新的dna測序技術(shù),,可以快速,、準(zhǔn)確地測定一段較短的目標(biāo)片段,。其基本原理如下:
第1步:1個特異性的測序引物和單鏈DNA模板結(jié)合,然后加入酶混合物(包括DNA Polymerase,、ATP Sulfurylase,、Luciferase和Apyrase)和底物混合物(包括APS和Luciferin)。