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技術(shù)文章
SDS-PAGE膠染色
點擊次數(shù)：2103 發(fā)布時間：2015-6-1
一、各種蛋白染色方法的靈敏度比較
| 染色方法 | 靈敏度 | 與質(zhì)譜的兼容性 |
|---|---|---|
| Silver | 1- 10ng | - |
| Silver (MS compatible) | 10ng | + |
| Comassie G -250 or R-250 | >30ng | + |
| Antibody(Western blot) | 1ng | - |
二,、考馬斯亮藍染色
CBB 染色液：0.5%考馬斯亮藍 G250 或 R250,；40%甲醇；10%乙酸,；將 CBB 溶于甲醇中并不停的攪拌 15min,。
加入乙酸與 ddH2O 脫色液：30%甲醇；10%乙酸
染色方法：1. 在搖床上染色 30min,；2. 脫色至蛋白點或條帶清晰可見；3. ddH 2O 洗 3-5 次,。
三,、膠體考馬氏亮藍染色 ColloidalCoomassie Staining（Cambridgecentrefor porteomics）
sensitivity = ~100ng
1. 固定：甲醇/ 醋酸/H 2O(45:1:54)至少 20min.
2. 染色 12-18hr。
染色液： 17% (w/v) 硫酸銨,；34%甲醇,；0.5%醋酸；0.1% (w/v) CoomassieG250,。
3. 脫色：用 H 2O 脫色至蛋白點和背景清晰.