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羊水細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備
點(diǎn)擊次數(shù)：983 發(fā)布時(shí)間：2014-12-2
一、原理
人的羊水細(xì)胞能長(zhǎng)成單層并可連續(xù)進(jìn)行傳代培養(yǎng),，但它們的一些特征與一般成纖維細(xì)胞不同,。在羊水中存在著各種不同類型的胎兒細(xì)胞，依據(jù)其外形和生長(zhǎng)特征可區(qū)分為以下三類：上皮細(xì)胞（E）,、成纖維細(xì)胞（F）和羊水細(xì)胞（AF）,。E細(xì)胞在胰酶消化的連續(xù)培養(yǎng)中不再生長(zhǎng)，所以在培養(yǎng)過(guò)程中的生長(zhǎng)期zui短,。AF細(xì)胞在再培養(yǎng)中一開(kāi)始就長(zhǎng)得很好,，染色體分析大多用這類細(xì)胞。F細(xì)胞在再培養(yǎng)中潛在的生長(zhǎng)期zui長(zhǎng),，在較老的羊水培養(yǎng)物中占優(yōu)勢(shì),。通常在培養(yǎng)后3-4天（可能更早些）即出現(xiàn)E細(xì)胞的集落，它們不適合再培養(yǎng)作染色體分析,。大約在第7天出現(xiàn)的AF細(xì)胞可被用于染色體制備,。如果在培養(yǎng)后第10天還未見(jiàn)長(zhǎng)出新的細(xì)胞，就應(yīng)考慮第二次羊膜穿刺,。
二,、用品和試劑
滅菌刻度離心管，0.25%胰蛋白酶,，生長(zhǎng)培養(yǎng)基（成分：RPMI-1640 80%,，滅活小牛血清20%），其余同外周血染色體制備,。
三,、操作步驟
1. 10-20ml無(wú)菌羊水，1000-1500rpm離心10分鐘,，吸去上清,，保留1ml羊水和沉降的細(xì)胞。
2. 用吸管使之懸浮,，并吸至25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,，每瓶含約0.3-0.5ml細(xì)胞懸液，再向其加入3ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。
3. 搖勻后37℃靜止培養(yǎng)5-7天（不要挪動(dòng),，以免影響細(xì)胞貼壁）。
4. 倒置顯微鏡觀察,，可見(jiàn)部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)并形成細(xì)胞小島，此時(shí)可以換液,。
5. 常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)至第9-11天即可收獲細(xì)胞,。
6. 終止培養(yǎng)前4小時(shí)加秋水仙堿，使終濃度為0.1微克/毫升。
7. 培養(yǎng)結(jié)束用1ml胰蛋白酶液消化5分鐘,，終止消化,，并轉(zhuǎn)移至10ml離心管中，1000rpm離心10分鐘,，收集細(xì)胞,。
8. 常規(guī)制備染色體，步驟同外周血染色體制備,。