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革蘭氏染色法（原理,、方法和意義）
點(diǎn)擊次數(shù)：940 發(fā)布時(shí)間：2014-11-27
革蘭氏染色法
是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭（Hans Christian Gram,，1853年－1938年）于1884年所發(fā)明,，zui初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關(guān)系,。
未經(jīng)染色之細(xì)菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小,，故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色,。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對(duì)比，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài),、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,，而用以分類鑒定。
實(shí)驗(yàn)原理
通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后,，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物,，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密,，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí),，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂,，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙,，，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi),，使其仍呈紫色,；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高,、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差,，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解,，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出,，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染,，就使革蘭氏陰性菌呈紅色,。
致病菌
如：金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌,、肺炎球菌,、白喉?xiàng)U菌、炭疽桿菌等 屬革蘭氏染色陽性菌,。
百日咳桿菌,、大腸桿菌、傷寒桿菌,、痢疾桿菌,、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌,、淋病雙球菌等 屬革蘭氏陰性,。
所以根據(jù)細(xì)菌的革蘭氏染色性質(zhì),，可以縮小鑒定范圍，有利于進(jìn)一步分離鑒定,，以對(duì)疾病做出診斷。又由于各種抗生素的抗菌譜不同,，革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考,。
實(shí)驗(yàn)方法
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染,、脫色,、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：
1）涂片固定,。
2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘,。
3）自來水沖洗。
4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘,。
5）水洗,，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數(shù)滴,，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色,，20秒后水洗，吸去水分,。
7）蕃紅梁色液（?。┤?分鐘后，自來水沖洗,。干燥,，鏡檢。
染色結(jié)果
革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色,，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色,。
臨床意義
其重要的臨床意義在于：
1、鑒別細(xì)菌
2,、選擇藥物
3,、與致病性有關(guān)：革蘭氏陽性菌能產(chǎn)生外毒素，革蘭氏陰性菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素,，兩者的致病作用不同,。