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CHO細(xì)胞與酵母細(xì)胞比較
點(diǎn)擊次數(shù)：3259 發(fā)布時(shí)間：2014-11-14
CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)與畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是當(dāng)前發(fā)展前景看好的兩個(gè)表達(dá)系統(tǒng),，為了能夠更加直觀地對(duì)兩個(gè)表達(dá)系統(tǒng)有一定的認(rèn)識(shí),，特意在此篇中對(duì)兩個(gè)表達(dá)系統(tǒng)作一定的比較，從而能夠更進(jìn)一步的對(duì)兩個(gè)表達(dá)系統(tǒng)有更深的了解
一,、CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
1,、優(yōu)點(diǎn)
CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞，既可以貼壁生長(zhǎng),。也可以懸浮生長(zhǎng),。目前常用的CHO細(xì)胞包括原始CHO和二氫葉酸還原酶雙倍體基因缺失型(DHFR-)突變株CHO。近年來(lái),，為降低生產(chǎn)成本和減少血制品帶來(lái)的潛在危害性,，動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)開(kāi)始使用無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)，但SFM往往導(dǎo)致細(xì)胞活力差,，貼壁性差,，分泌外源蛋白的能力差等缺點(diǎn)。另有研究者嘗 試將類胰島素生長(zhǎng)因子IGF基因和轉(zhuǎn)鐵蛋白基因轉(zhuǎn)入CHO細(xì)胞獲得能自身分泌必需蛋白的“超級(jí)CHO”,，無(wú)需在培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素,，細(xì)胞可在SFM中生長(zhǎng)良好。與其他表達(dá)系統(tǒng)相比,，CHO表達(dá)系統(tǒng)具有以下的優(yōu)點(diǎn)：
（1）具有準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄后修飾功能,，表達(dá)的蛋白在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面zui接近于天然蛋白分子,；
（2）既可貼壁生長(zhǎng),，又可以懸浮培養(yǎng),，且有較高的耐受剪切力和滲透壓能力；
（3）具有重組基因的擴(kuò)增和表達(dá)能力,，外源蛋白的整合穩(wěn)定,；
（4）具有產(chǎn)物胞外分泌功能，并且很少分泌自身的內(nèi)源蛋白,，便于下游產(chǎn)物分離純化,；
（5）能以懸浮培養(yǎng)方式或在無(wú)血清培養(yǎng)基中達(dá)到高密度培養(yǎng)。且培養(yǎng)體積能達(dá)到1000L以上,，可以大規(guī)模生產(chǎn),。
2、存在的問(wèn)題
在過(guò)去的幾十年里,，人類對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了大量的研究開(kāi)發(fā),，取得了很大進(jìn)展，但是利用CHO細(xì)胞表達(dá)外源基因的技術(shù)水平尚不能滿足生物藥品的開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)的要求,，目前上游工作中主要存在以下問(wèn)題：
（1）構(gòu)建的重組CHO細(xì)胞生產(chǎn)效率低,，產(chǎn)物濃度亦低；
（2）某些糖基化表達(dá)產(chǎn)物不穩(wěn)定,，不易純化,；
（3）重組CHO細(xì)胞上游構(gòu)建與下游分離純化脫節(jié)，主要表現(xiàn)在上游構(gòu)建時(shí)著重考慮它的表達(dá),，而對(duì)高教表達(dá)的產(chǎn)物是否能有效地提取出來(lái),，即分離純化過(guò)程考慮較少；
（4）重組細(xì)胞培養(yǎng)費(fèi)用昂貴,，自動(dòng)化水平低下,。