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脾細胞和骨髓瘤細胞的融合
點擊次數(shù)：1421 發(fā)布時間：2014-11-13
1、脾細胞和骨髓瘤細胞一般按2：1-5：1的密度混合,，有的報道可以到10：1,，不過總體來說我們常選3：1-5：1，記住,，原則是脾細胞的數(shù)量比骨髓瘤的多,。
2、融合前,，一般用HAT培養(yǎng)基做飼養(yǎng)細胞鋪板,，這是融合前的準備工作，因為飼養(yǎng)細胞分泌的某些細胞因子有助與融合的雜交瘤細胞生長,，并且提供一定的細胞密度,。通常是可以融合前一天做飼養(yǎng)細胞，老鼠選ICR或是BALB/C與ICR雜交的鼠,，一只老鼠可以鋪2-3塊96孔板,。
3、我們?nèi)诤线x用96孔細胞培養(yǎng)板,。融合時將脾細胞與骨髓瘤混合后離心,，然后用手掌稍稍搓離心管，將離心壓緊的細胞松散開,，再加融合劑PEG,，在45秒內(nèi)加完1毫升的PEG，之后靜置30-60秒,，這個時間時給PEG作用使細胞膜融合的,，此時將離心管握在手中，利用自己的體溫給細胞一個比較溫暖的環(huán)境,。之后加30-40毫升DMEM終止（1640也行,，只要用不*培養(yǎng)基即可），一般前30-45秒速度慢一些,，中間30秒可以一滴滴的加,，zui后30-60秒就快速加。終止后靜置在37度水浴約10分鐘,，然后離心,，用HAT重懸，分裝96孔板即可。
4,、融合后3-4天補加HAT培養(yǎng)基（2-3滴）,，融合后7-8天則開始給細胞換液，用HT培養(yǎng)基培養(yǎng),，根據(jù)你的細胞具體情況看,，可以換1-2次液。一般細胞如果狀態(tài)好的話,，9-11天就可以生長起來了,，后面檢測細胞時HT培養(yǎng)細胞。